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该试验以经甲醛减毒后的眼镜王蛇毒为抗原,经皮下多点免疫产卵莱杭母鸡,对聚集入鸡卵黄中的抗体(IgY)中和相应蛇毒的药效学作一基础研究.第一,IgY的分离纯化.收集的鸡卵黄经水稀释法处理后离心,取上清液,经双向免疫扩散反应证实,第一次免疫后2周IgY与眼镜王蛇毒液之间即有明显沉淀线产生.ELISA结果显示免疫后12天开始出现特异性抗体,且抗体滴度逐渐升高,最高可达1:100000,约在免疫后60天左右,此最高滴度可维持30天,以后滴度逐渐降低,至免疫后100~110天,滴度仍可维持在最高滴度的一半(1:50000),到免疫后130天以后滴度才逐渐消失.用AKATAexplorer蛋白纯化仪,将蛋黄上清上HiTrap IgY纯化柱.洗脱峰经筛选后,活性峰经10％SDS PAGE蛋白电泳见以一条蛋白带为主,分子量为193KD,还原状态下显示由两条重链(68KD)和两轻链(32KD)构成.经Folin Lowry法测定表明,每枚蛋中平均蛋白含量为97.5mg.第二,IgY理化特性和药效学研究.该试验采用敏感的ELISA对IgY的稳定性进行研究,发现IgY有较高的稳定性,在温度不高于65℃条件下仍保持其活性,70℃时开始下降,至80℃几乎失活;在pH不高于12和不低于2的环境中,37℃下2小时后IgY活性无明显变化,而在pH12时活性下降,在pH13时活性迅速下降,并且很快失活;IgY经胰蛋白酶处理1小时,活性是阳性对照的80％,2小时以后活性完全消失.NIH小白鼠体内保护试验显示纯化后的抗体能中和2个LD<,50>的蛇毒,而体外中和试验显示其能有效中和3个LD<,50>的蛇毒.该试验结果显示,经眼镜王蛇毒免疫后的母鸡能制备大量有效、高滴度的抗体,此抗体经粗提与纯化后,能有效对抗眼镜王蛇毒素的作用,因此,在目前临床尚无特异的抗眼镜王蛇毒抗体的情况下,鸡卵黄抗体作为可能的特效药有开发前景,并将为其它生物毒素的卵黄抗体开发提供研究平台.