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[目的]明确肠胃清对结肠癌L-OHP治疗的增效作用,确定肠胃清作用后结肠癌细胞DNA损伤修复相关途径的变化,阐明中药对铂类药物增效的分子机制,为改善肿瘤细胞对化疗的敏感性,进一步提高结肠癌疗效,提供实验依据。
[方法]采用逐步增加亲代细胞药物浓度与间断大剂量浓度药物相结合的方法,诱导建立人结肠癌耐药细胞株HCT116/L-OHP;采用细胞培养技术,观察肠胃清药物血清对人结肠癌细胞株HCT116及耐药细胞株HCT116/L-OHP生长抑制作用,及肠胃清药物血清的增效作用;以反映碱基切除修复能力的XRCC1、XRCC2及核苷酸切除修复能力的ERCC1、XPF为指标,采用Western blot方法,从DNA损伤修复的两条通路,观察L-OHP、肠胃清药物血清对上述指标的影响,以及肠胃清药物血清对L-OHP效果的增效作用;以AP位点作为DNA损伤检测指标,观察L-OHP、肠胃清药物血清对AP位点水平的影响,以及肠胃清药物血清对L-OHP效果的增效作用。
[结果]本研究建立人结肠癌耐药细胞株HCT116/L-OHP,耐药倍数17.00倍,具有多药耐药细胞基本生物学特性;肠胃清药物血清可逆转HCT116/L-OHP多药耐药,与L-OHP,DDP,5-FU,HCPT联合逆转倍数分别为7.15倍,2.81倍,1.78倍,3.00倍。HCT116/L-OHP中XRCC1、XRCC2、XPF、ERCC1的含量较HCT116均显著增多(p＜0.05),AP位点表达较HCT116显著减少(p＜0.05),HCT116经L-OHP、L-OHP+肠胃清药物血清联合作用后XRCC1、XRCC2、ERCC1蛋白含量均显著减少(p＜0.05),AP位点表达均显著增加(p＜0.05),HCT116/L-OHP中XRCC1、XRCC2、XPF、ERCC1蛋白含量及AP位点表达各组间比较均无统计学意义,但L-OHP联合肠胃清药物血清组与对照组相比XRCC2、XPF、ERCC1蛋白含量有减少趋势;肠胃清高剂量+L-OHP组对两种移植瘤瘤体生长抑制均最明显,两组移植瘤小鼠体重在治疗后均有减轻,以L-OHP组最为显著。
[结论]肠胃清可逆转HCT116/L-OHP细胞的MDR现象,增加L-OHP对HCT116、HCT116/L-OHP的抑制作用,其机理可能是肠胃清通过降低细胞BER、NER的能力,抑制细胞DNA修复,导致DNA损伤加重,干扰DNA复制,达到增效目的。