超抗原SEB防治高危角膜移植免疫排斥反应作用机制研究

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目的探讨细胞因子和树突样细胞(DC,dendriticcell)参与超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB,StaphylococcalEnterotoxinB)在防治大鼠高危角膜移植排斥反应过程中的作用并比较SEB与糖皮质激素抑制高危角膜移植免疫排斥作用的差别。 方法供体为纯系Fisher344大鼠,受体为纯系Lewis大鼠,将受体大鼠随机分为3个组。SEB治疗组和对照组分别于术前腹腔注射0.2mlSEB(75μg/ml)和生理盐水0.2ml三次,间隔4天;地塞米松组于术后第1天开始结膜下注射0.1ml(1mg/ml),1次/日,共两周。角膜缝线诱导受体角膜新生血管以建立高危角膜模型,取新生血管符合评分等级的大鼠行穿透性角膜移植术,术后主要根据角膜植片的混浊状况进行等级评分判断其是否发生免疫排斥反应。免疫组化染色检测术前及术后第10、30天角膜植片中细胞因子(IL-1β、IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10,TNF-α)及DC(CD11c、CD80、MHC-Ⅱ)表达情况;液相芯片技术检测术前及术后第10、30天房水和外周血中细胞因子(IL-1β、IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-10,TNF-α)水平;流式细胞技术检测术后第10、30天外周血淋巴细胞(CD4+T,NKT)百分数。 结果对照组角膜植片的平均存活时间为6.9±1.8d,SEB组为10.7±1.6d,地塞米松组为14.0±3.9d。同对照组相比,SEB组和地塞米松组角膜植片存活时间明显延长(P=0.000)。SEB组和地塞米松组间差异无统计学意义(P=0.013)液相芯片检测显示:各组大鼠角膜移植术后房水和外周血中细胞因子表达逐渐增强,在术后第10天达到峰值。同对照组比较,SEB组房水中IL-1β水平降低,IFN-γ、IL-4、IL-6水平明显升高。外周血中细胞因子检出种类及含量明显少于房水,变化趋势接近房水;免疫组织化学染色结果显示:同对照组比较,SEB组角膜植片中细胞因子IL-2表达明显减少,而IL-4、IL-6、IL-10水平明显升高;植片中DC表达趋势同SEB组和对照组,但其表型不同。对照组可能以成熟DC为主,SEB组可能以未成熟DC为主;流式细胞技术检测显示:同对照组比较,SEB组CD4+T淋巴细胞百分数减少而NKT细胞百分数升高。术后第30天,房水和外周血中检出的细胞因子种类和含量明显减少。三组房水中细胞因子含量接近,SEB组和地塞米松组外周血中细胞因子含量明显少于对照组;免疫组化染色结果显示:同对照组比较,SEB组角膜植片中IL-1β水平与其接近,IL-2、IFN-γ、TNF-α减少,IL-4、IL-6、IL-10升高;三组植片中DC表达接近,且可能趋于成熟;流式细胞技术检测显示:三组CD4+T淋巴细胞百分数均较前有所提高,而NKT细胞百分数较前减少。SEB组CD4+T淋巴细胞百分数仍少于对照组而NKT细胞百分数仍明显高于对照组。 结论与糖皮质激素无选择免疫抑制作用不同,SEB可能通过影响眼局部细胞因子的产生调节免疫反应,诱导免疫耐受,抑制角膜移植免疫排斥反应发生。DC和NKT细胞也可能参与作用,促进免疫耐受的诱导。
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