马鞍藤内生真菌及其次级代谢产物的研究

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马鞍藤(Ipomoea pes-caprae (L.) Sweet)是一种多年生草本植物,为旋花科,番薯属植物。中华草本记载:马鞍藤全草切段或片,晒干入药,主治:除风祛湿、消痈散结、炎症。马鞍藤作为药用植物含有旋花科植物特有的化学成分树脂糖甙,部分学者对马鞍藤化学成分的研究中,已经分离到树脂糖甙。对植物的研究是为了开发出有生物活性的化学物质,而大规模利用植物源具生物活性的化学成分,就需要大量采挖植物资源,这不利于对生态环境的保护。植物内生真菌的研究为获得大量的天然药物资源提供了很好的前景,植物内生真菌是具有高度多样性的微生物资源,代谢产物多种多样,为天然活性物质获得提供丰富的资源。由于植物内生真菌长期与宿主植物互惠共生,所以能产生与宿主植物相同的化学成分,本文旨在从马鞍藤中筛选出产树脂糖甙的内生真菌,并研究了分离得到内生真菌的次生代谢产物。本文从马鞍藤的根茎叶中共分离得到约120株内生真菌。根据形态特征对这120株内生真菌大致分类后,对每个类别的真菌进行发酵,筛选出能产生树脂糖甙的内生真菌。以马鞍藤甲醇浸泡液浓缩的粗提物作为对照,利用薄层色谱筛选出一株产树脂糖甙的内生菌株MJ-8。通过形态学鉴定,将其归属为拟盘多毛孢属,通过分类学鉴定,初步认定其为一种新的菌种。为了提高树脂糖甙的产量,对菌株MJ-8的发酵培养基在察氏培养基的基础上进行了优化。最后得出α-乳糖为最佳碳源,硫酸铵为最佳氮源,其他营养参照察氏培养基。参考优化结果发现,对菌株MJ-8发酵16天能得到最高产量。为获得大量的发酵液,本实验利用发酵罐技术对菌株MJ-8进行大量发酵,正丁醇萃取其发酵液,利用柱色谱法和高效液相色谱法等对其粗提物进行研究。从中分离纯化了10个化合物,利用NMR和2D NMR等技术鉴定出化合物A6为糖甙类化合物。其结构鉴定为:丁醇-乳糖甙。
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