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沙门菌是一种兼性胞内致病菌,能够引起系统或局部感染。宿主感染后既可引起胃肠炎、流产、败血症等症状,又可表现为带菌不发病的状态。随着抗菌药物在临床和动物饲料中的广泛使用,沙门菌耐药性日趋严重,在多种动物中的感染率亦逐渐上升,引起了巨大的经济损失。沙门菌的鉴定主要是通过细菌分离、血清型鉴定、生化鉴定等传统方法,但是传统方法费时费力,有些血清型难以区分。因此,迫切需要一种能够快速检测沙门菌的方法,并且采取有效的防制措施来降低家禽的感染率,提高家禽及其产品的质量。本研究根据沙门菌属特异性基囚(hut)及肠炎沙门菌(Sdf Ⅰ),鼠伤寒沙门菌(Spy),鸡白痢沙门菌(glgC,鸡伤寒沙门菌(glgC和speC)的血清型特异性基因分别设计一对引物,建立了mPCR方法,可同时检测鉴定出肠炎沙门菌、鼠伤寒沙门菌、鸡白痢沙门菌及鸡伤寒沙门菌。选取由mPCR方法鉴定出的鸡白痢沙门菌S004、S005、S017及实验室保存菌S6702株,利用λRed同源重组技术,成功构建了鸡白痢沙门菌αroA缺失株：S004AaroA、 S005AaroA、S017AaroA和S6702AaroA,并对其生物学特性及毒力进行了测定,为沙门菌减毒活疫苗的研制奠定了基础。1快速检测肠炎、鼠伤寒、鸡白痢及鸡伤寒沙门菌mPCR方法的建立根据沙门菌属特异性基因(hut、495bp)及肠炎沙门菌(SdfⅠ、304bp)、鼠伤寒沙门菌(Spy、401bp)、鸡白痢沙门菌(glgC、252bp)和鸡伤寒沙门菌(glgC、252bp和speC、174bp)的血清型特异性基因分别设计引物,调节模板用量,dNTP、Taq酶的比例和退火温度,建立mPCR方法。菌液PCR敏感度结果显示：肠炎沙门菌、鼠伤寒沙门菌、鸡白痢沙门菌和鸡伤寒沙门菌的最低检出量均为3×103CFU；提取沙门菌DNA的敏感度结果显示：鉴别肠炎、鼠伤寒、鸡白痢和鸡伤寒沙门菌的最低检量分别为162pg/μL、202pg/μL、214pg/μL和178pg/μL。与常规的分离鉴定相比,所建立的mPCR检测沙门菌属和鼠伤寒沙门菌的敏感性、特异性、符合率均为100%;检测肠炎沙门菌的敏感性、特异性、符合率分别为100%、98%、98.2%；检测鸡白痢沙门菌的敏感性、特异性、符合率分别为100%、94.6%、96.4%。不在其中的血清型也可以通过属特异性基因hut基因的扩增检测出,因此不会漏检临床样品中的沙门菌。2鸡白痢沙门菌aroA基因缺失株的构建及其生物学特性的初步研究根据GenBank提供的基因序列扩增鸡白痢沙门菌临床分离菌株的aroA基因。利用λRed同源重组技术,构建鸡白痢沙门菌aroA缺失株：S004△aroA、S005△aroA、S6702△aroA和S6702△arnA。通过PCR鉴定,缺失株构建成功。4株野生株及其缺失株的生长曲线显示,野生株中S6702生长速度最快,其它3株鸡白痢沙门菌生长速度相似；与野生株相比,缺失株的生长速度均有所下降,缺大株中S6702△aroA生长速度最快。用不同剂量的野生株与缺失株分别通过肌肉接种2日龄SPF雏鸡,测定其半数致死量(LD50),结果显示,野生株S004、S005、S017和S6702的LD50分别为106.30、107.040、106.612和108.34,而缺失株S004△aroA、S005△aroA、S6702△aroA和S6702ΔaroA的LD50分别为108.60、108.256、108190和108.57。可以看出,S004缺失株毒力显著降低,S6702缺失株毒力降低最少,但是其野生株毒力较其他野生株毒力也较弱。因此,aroA的缺失对鸡白痢沙门菌的致弱作用与菌株有关。鸡白痢沙门菌aroA致弱株的构建为疫苗候选株的筛选奠定了基础。