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研究背景: 分化簇47（Cluster of differentiation 47，CD47）是一种跨膜蛋白，它是由特定的整合素、G 蛋白和胆固醇组成的超分子复合物,可以通过不同的剪接方法来表达不同的功能。它们的功能大多与整合素相关,因此又称整合素相关蛋白(整合素相关蛋白,IAP)。CD47配体是信号调节蛋白α(SIRP-α),主要表达在巨噬细胞、树突状细胞和神经细胞中,通过与细胞表面受体配体、免疫自稳定性和神经网络的联系来调节细胞迁移和吞噬。目前已得到证实，在多种肿瘤细胞表面 CD47高表达，其与巨噬细胞形成CD47/SIRP-α通路可以有效的表达“别吃我”信号，这是肿瘤细胞免疫逃逸的机制之一。肿瘤干细胞是参与肿瘤细胞增殖、分化、转移的重要角色，研究发现CD47在多种肿瘤的肿瘤干细胞中也存在高表达，能够帮助肿瘤干细胞逃避巨噬细胞的吞噬作用，最终导致肿瘤复发和恶化。本课题拟通过检测CD47在膀胱癌中的表达情况，分析其与膀胱癌临床病理分期的相关性，进一步阐述CD47与膀胱癌术后患者的预后疗效的关系，为CD47作为膀胱癌患者术后的预后评估指标提供理论基础。在尿液中寻找膀胱癌肿瘤标志物以期用来诊断膀胱癌，是目前该领域的研究热点。大量研究已经证明CD47几乎在所有细胞上均有不同程度的表达，因此本课题组提出合理假说：尿液作为与膀胱直接接触的液体，在膀胱癌患者的尿液中含有尿脱落细胞，膀胱肿瘤脱落下来的粘膜以及膀胱肿瘤分泌的多种物质等，CD47作为广泛表达的膜蛋白，应同样表达于尿液中的各种来源的脱落细胞。因此检测患者尿液中CD47的表达可能是膀胱癌早期无创筛查的新手段。本课题拟通过探究CD47的差异性表达为膀胱癌进行早期诊断及预后评估提供新的思路和理论基础。 目的： ①检测CD47在膀胱癌组织中的表达，结合临床病理分期，分析CD47与患者预后的关系，为 CD47 作为膀胱癌患者预后评估指标提供理论基础。②检测CD47在膀胱癌患者尿液中的表达情况，并对比临床组织样本病理诊断这一“金标准”，探讨通过尿液检测CD47作为膀胱癌早期无创性筛查新手段的可能性。③检测CD47在细胞水平的分布和表达情况，为进一步阐述CD47所介导的免疫逃逸机制提供前期基础。 方法： ①收集郑州大学第一附属医院2015-2017年膀胱癌全切样本34对（癌组织、癌旁组织），通过qPCR及Western Blot技术，分别从RNA水平及蛋白质水平分析癌与癌旁组织中CD47的表达差异。②根据不同的膀胱癌TNM分期，筛选出20例膀胱癌组织蜡块进行切片，通过免疫荧光和免疫组化，进一步确定CD47在膀胱癌中表达情况，并分析其与膀胱癌分期的相关性。③收集郑州大学第一附属医院2017年新入院初诊为膀胱癌，且术后病理诊断为膀胱癌的住院患者术前新鲜晨尿 24 例，健康人群新鲜晨尿 17 例，选取样本尿常规均无明显异常。提取尿液中脱落细胞的RNA，检测CD47的表达量，研究尿液中CD47表达量与膀胱癌的相关性。④选用T24、5637、J82 膀胱癌细胞和SV-HUC-1正常尿路上皮细胞，免疫荧光，qPCR及Western Blot分别检测CD47在4株细胞系中的表达情况。 结果： ①在mRNA水平上，膀胱癌组织中CD47的表达水平为2.17 ± 0.72，较膀胱癌旁组织表达水平升高（P< 0.05）。在蛋白水平上，与膀胱癌旁组织相比，膀胱癌中CD47表达水平高（1.58 ±0.45，P<0.05）。②免疫荧光结果显示，肌层浸润性膀胱尿路上皮癌CD47阳性细胞率为38.3 ±4.09%，非肌层浸润性膀胱尿路上皮癌组CD47阳性细胞率为21.2 ± 3.43%，膀胱原位癌组CD47阳性细胞率为4.95 ±1.59%，正常膀胱组CD47阳性细胞率为1.90 ±0.447%，即CD47表达水平与膀胱癌临床分期呈正相关（P<0.05）；免疫组化结果显示，肌层浸润性膀胱尿路上皮癌CD47阳性细胞率为43.3 ±5.24%，非肌层浸润性膀胱尿路上皮癌组CD47阳性细胞率为31.6 ±3.52%，膀胱原位癌组CD47阳性细胞率为7.93 ± 1.90%，正常膀胱组CD47阳性细胞率为1.82 ± 0.522%，即CD47表达水平与膀胱癌临床分期呈正相关（P< 0.05），与免疫荧光结果一致。③在膀胱癌患者尿液中CD47的表达水平（0.090 ± 0.057）较正常组尿液中CD47表达水平升高（0.056 ±0.029，P<0.05），CD47作为尿液中的膀胱癌筛查标志物，其灵敏度为66.7%，特异度为53.0%。④ 免疫荧光显示下，CD47主要分布在细胞膜上，mRNA水平上，CD47在膀胱癌5637细胞中表达最高（0.199 ±0.032），T24细胞（0.118 ±0.032）次之，J82细胞（0.052 ±0.015）中最低，且均大于正常尿路上皮细胞系SV-HUC-1(0.014±0.006，P< 0.05）；蛋白水平上，膀胱癌5637细胞中CD47表达最高（0.290 ±0.046），其次是T24细胞（0.189 ±0.025），J82细胞中CD47的表达水平相对最低（0.125 ± 0.028），且均大于正常尿路上皮细胞系SV-HUC-1（0.067±0.015，P< 0.05） 结论： ① CD47 在人膀胱癌组织中较癌旁组织表达水平升高，且其表达水平与临床分期呈正相关。② CD47 在膀胱癌患者尿液中较健康人群尿液中的表达水平升高。③ CD47 在膀胱癌细胞系 5637、T24、J82 中较正常尿路上皮细胞系SV-HUC-1表达水平均升高，且在5637细胞系表达水平最高，T24次之，J82表达最低。