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目的构建携带人GITR基因胞外段真核表达质粒pDisplay-hGITRaa1-165,构建人hGITRaa1-165-IgGl Fc段融合蛋白的真核表达载体hGITRaa1-165-IgG1 Fc/pcDNA3.1（+）,并在COS-7细胞中进行蛋白表达。方法（1）以pGEMT-GITR质粒为模板,进行PCR反应,获得含人GITR胞外段的基因。目的基因经BglⅡ和PstⅠ双酶切,1%琼脂糖电泳后切胶回收并与同样处理的真核表达载体pDisplay连接,转化大肠埃希菌DH5a,以构建pDisplay-hGITRaa1-165真核表达质粒,双酶切及序列测定鉴定阳性重组子。制备真核表达质粒pDisplay-hGIWRaa1-165,通过脂质体法转染COS-7细胞,并按照不同时间收集细胞上清。Western blot法检测pDisplay-hGITRaa1-165融合蛋白的表达。（2）以PCR方法从阳性TA克隆中获得hGITR胞外段(hGITRaa1-165)基因,连接至hIgG1Fc-pcDNA3.1（+）质粒（含人IgG1-Fc基因）,转化DH5a宿主菌,选择阳性株,抽提质粒,进行HindⅢ和BamHⅠ双酶切及测序鉴定。以同样方法构建对照质粒eGFP-IgG1 Fc/pcDNA3.1（+）。制备真核表达重组质粒,脂质体法转染COS-7细胞,设定不同的转染条件,并按照不同时间收集细胞上清。Western blot法检测hGITRaa1-165-IgG1 Fc/pcDNA3.1（+）融合蛋白的表达。将hGITRaa1-165-IgG1 Fc融合蛋白分别与THP-1,HUEVC细胞共培养后,在不同时间段进行细胞计数。结果（1）通过PCR获得大小为hGITRaa1-165基因片段,构建pDisplay-hGITRaa1-165真核表达质粒,经PCR及双酶切鉴定均可见目的条带,测序结果显示100%正确。Western blot法检测到pDisplay-hGITRaa1-165蛋白在COS-7细胞中的表达,蛋白分子量大约为15KD。（2）成功构建hGITRaa1-165-IgG1 Fc/pcDNA3.1（+）真核表达质粒,测序结果通过Pubmed Blast发现与GenBank中的序列一致。根据对照质粒eGFP-IgG1Fc/pcDNA3.1（+）转染COS-7细胞选择最佳转染条件,DNA质量/转染试剂梭华-SofastTM体积为1:3,收集蛋白最佳时间为48h。通过Western blot法检测到转染细胞上清中存在融合蛋白。初步结果显示hGITRaa1-165-IgG1 Fc/pcDNA3.1（+）融合蛋白能促进THP-1细胞的生长。结论成功构建pDisplay-hGITRaa1-165表达载体及hGITRaa1-165-IgG1 Fc/pcDNA3.1（+）载体,并在COS-7细胞中表达目的蛋白,为GITR的生物学功能研究奠定了基础。