【摘 要】
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我们利用肌动蛋白能和抗兔α-平滑肌肌动蛋白的单克隆体发生专一性很强的免疫交叉反应.为了进一步了解衣藻肌动蛋白在体内外的性质和功能以及为研究植物微丝骨架的体运动提供
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我们利用肌动蛋白能和抗兔α-平滑肌肌动蛋白的单克隆体发生专一性很强的免疫交叉反应.为了进一步了解衣藻肌动蛋白在体内外的性质和功能以及为研究植物微丝骨架的体运动提供可视化的转产系统,我们将衣藻肌动蛋白基因与绿色荧光蛋白基因融合后,分别构建到原核、植物及酵母表达载体中,并在BL21plus细菌、烟草悬浮细胞和裂殖酵母中得到正确表达.肌动蛋白-绿色荧光蛋白的融合基因的原核表达产物经过硫酸铵分级沉淀、离子交换层析和疏水柱层析后,得以纯化.在聚合条件下,纯化的融合蛋白能在体外聚合成为丝状结构即F-actin.在变性条件下,用Ni亲和层析的方法能获得大量高纯度的融合蛋白.圆二色谱结果表明,在变性条件下纯化的融合蛋白和鸡肌肉的肌动蛋白二级结构有一定差异.通过SDS-PAGE和Western-blotting鉴定,融合蛋白在酵母细胞中也得到了正确和高效地表达.达到的融合蛋白在细胞中发生聚集,可能未参与到酵母细胞的结构中.
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