LKB1过表达对人甲状腺乳头状癌细胞增殖、迁移的影响

来源 :华北理工大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:william__2008
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目的:探讨LKB1过表达对人甲状腺乳头状癌细胞增殖、迁移的影响。  方法:首先利用Western blot检测正常甲状腺Nthy-ori3-1细胞和甲状腺乳头状癌K1细胞中LKB1蛋白的表达;其次将生长状态良好的甲状腺乳头状癌K1细胞随机分为Control组、NC组和Lenti-h-LKB1组,其中Control组不做任何处理,NC组转染携带GFP的空载病毒,Lenti-h-LKB1组转染携带GFP的LKB1重组真核体,72h后在倒置荧光显微镜观察GFP表达并判断转染效率。取转染效率大于80%的细胞备用。RealtimePCR法检测各组细胞内LKB1mRNA表达,Western blot法检测细胞内LKB1蛋白表达,从而验证LKB1过表达细胞模型是否构建成功。利用MTT法分别于转染成功后24h、48h、72h、96h后检测各组细胞增殖能力。转染成功后24h,利用Transwell实验检测各组细胞迁移能力,流式细胞仪分析各组细胞周期变化。  结果:与正常甲状腺Nthy-ori3-1细胞相比,K1细胞中LKB1蛋白表达降低,差异具有统计学意义(t=40.376,P<0.01)。转染72h后在倒置荧光显微镜下观察,当感染复数(MOI)约60时,病毒转染效率达80%以上。Realtime PCR结果显示,Lenti-h-LKB1组LKB1mRNA相对表达量为(5.992±0.610),高于Control组(1.000±0.000)、NC组(1.065±0.198),差异具有统计学意义(F=444.557,P<0.01),Control组与NC组之间无明显差异(P>0.05)。Western blot结果与RealtimePCR结果一致,Lenti-h-LKB1组LKB1蛋白相对表达量为(1.152±0.042),显著高于Control组(0.339±0.021)和NC组(0.343±0.049),差异具有统计学意义(F=428.530,P<0.01),Control组与NC组之间无明显差异(P>0.05),说明成功构建LKB1过表达细胞模型。MTT实验结果显示,48h、72h、96h Lenti-h-LKB1组细胞增殖能力均低于Control组和NC组,差异具有统计学意义(P均<0.01),而24h各组细胞增殖能力无明显差异(P>0.05)。Transwell实验结果显示,Lenti-h-LKB1组平均穿膜细胞数为(118.000±7.714)个/视野,显著低于Control组(334.800±16.829)个/视野和NC组(332.400±18.528)个/视野,差异具有统计学意义(F=338.831,P<0.01),Control组与NC组之间比较无明显差异(P>0.05)。流式细胞仪结果显示,Control组、NC组、Lenti-h-LKB1组G0/G1期细胞百分比分别为(44.065±0.021)%、(43.740±0.226)%、(58.260±1.044)%,S期细胞百分比分别为(43.755±0.205)%、(43.425±0.304)%、(34.890±0.506)%,与Control组、NC组比较,Lenti-h-LKB1组G0/G1期细胞增多,S期细胞减少,差异均具有统计学意义(F=310.187,P<0.01;F=3352.726,P<0.01),Control组与NC组之间差异无统计学意义(P>0.05)。  结论:1甲状腺乳头状癌K1细胞中LKB1蛋白表达降低。2LKB1过表达能抑制人甲状腺乳头状癌K1细胞增殖、迁移。
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