重金属镉生物检测工程菌株的构建及应用

来源 :华中科技大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:mailyangli
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:以绿色荧光蛋白(GFP)基因为报告基因,和重金属镉特异性启动子PcadA构建成基因工程重组体导入宿主菌,用于重金属镉的特异性检测。 方法:采用聚合酶链式反应(PCR)从质粒pPcadA上扩增得到重金属镉离子特异性启动子PcadA,以绿色荧光蛋白基因为报告基因,以大肠杆菌-枯草杆菌穿梭载体pNGFP构建了绿色荧光蛋白镉离子诱导表达载体。以枯草芽孢杆菌1A751为宿主菌,采用感受态转化法将表达载体导入1A751,成功构建镉离子检测工程菌株。 分别采用不同种类的金属离子对工程菌株进行诱导试验,通过测定荧光强度考察工程菌株对镉离子的特异性。将工程菌株暴露于不同浓度的二价镉离子(Cd2+)环境中,在一定的时间内测定荧光强度的大小,考察工程菌株对镉离子的敏感性,了解工程菌株对Cd2+的敏感浓度范围及响应时间并考察工程菌株用于快速检测重金属镉的可行性。 结果:从工程菌株中提取的重组质粒pPcadA-gfp通过酶切鉴定、PCR鉴定显示启动子已成功插入载体DNA中,DNA序列分析与预期结果完全一致,说明重组体pPcadA-gfp构建成功。 工程菌株对镉以外的11种重金属离子(As3+、Co2+、Cu2+、Fe2+、Hg2+、Mn2+、Ni2+、Pb2+、Sb3+、Sn2+、Zn2+)基本没有响应,仅对Cd2+产生明显的效应,说明工程菌株对镉离子具备较好的特异性。 使用不同浓度的镉在诱导不同时间后观察GFP的表达情况,发现工程菌株对Cd2+的敏感性较好,检测范围为1μM-500μM,在1μM-250μM之间时荧光强度与镉离子的浓度呈正相关。检测下限为1μM,响应时间为15min,在暴露于重金属镉后15min-10hr范围内,工程菌株对敏感浓度内的Cd2+均有很好的响应。 结论:实验表明,该工程菌株能够以绿色荧光蛋白基因为报告基因检测培养体系中最低浓度达1μM的镉离子;利用该菌株有望建立起一种方便快捷的重金属镉的检测方法,有很强的应用价值。
其他文献
框架剪力墙结构施工技术已经是建筑工程施工中广泛采用的技术形式,能够促进施工环节有序进行,为建筑工程施工质量和施工进程奠定良好基础,并能优化配置建筑资源和材料,提高建
本文针对白云鄂博低品位复杂共生矿中铌资源高效利用问题,在“高炉炼铁-铁水脱磷、脱硫预处理-转炉炼钢”三步法冶炼铌微合金钢的工艺过程中,通过热力学分析,结合高温模拟实验,建
建筑工程进度控制是存在于整个工程建设始终的,进度控制需要施工人员、监理人员以及管理人员共同配合.工程进度控制在项目管理是极为重要的,关系到工程建设目标能否顺利实现,
为了解工业副产品AF3FTM替代萤石在炼钢生产中的冶金效果,针对两种化渣剂在冶金过程中的特定用途,分别进行了熔渣熔化特性测试、熔渣黏度测试、实验室模拟铁水及钢水脱硫试验和
改革开放以来,国内基础设施建设逐步完善,土木工程建设在全国各地展开.本文将简单分析施工管理在土木工程施工中的应用.
施工过程中安全管理是施工管理的重要组成部分,其中机械安全管理是最重要的.在工程建设的过程中,采取有效措施,确保机械设备的正常和安全使用,防止施工设备事故的发生是一个
隧道是我国的一种很重要的交通设施,我国各个城市都在尽全力发展隧道的建设,并取得了一定的成效.在隧道工程的施工过程当中,经常会发生施工监理不到位现象.这个现象的存在,给
建筑工程勘察是一项重要而严谨的工作,肩负着保证建筑工程质量和安全的重任.它与设计、施工密切相关,起着承上启下的作用.由于设备、人员、环境、技术等因素的影响,建筑工程
微循环是血液循环的重要组成部分,对它的研究常用于帮助发病机理的理解,病情的分析和判断。在许多严重的疾病中,如败血症、慢性溃疡、糖尿病、高血压等,微循环的许多特性将发
关于中国国际角色定位的问题,长期以来一直备受学术界的关注.主要原因就在于,一方面,中国的崛起速度之快出人意料;另一方面,国际权力转移所引发的国际体系、全球治理机制都发
期刊