目的 热休克蛋白GrpE是热休克蛋白超家族70重要成员之一,被认为是一种负性调控基因。该基因在肺炎链球菌的感染中有相关作用。对肺炎链球菌热休克蛋白GrpE进行克隆表达,纯化及热稳定性测定,以便于进一步分析肺炎链球菌感染的分子机制。方法设计特异性引物,通过PCR技术扩增目的基因。构建pW28-GrpE重组表达质粒。在大肠杆菌(Escherichia coli, E.coli) B834中获得可溶性上清表达。利用Ni2+-NTA亲和层析柱、DEAE阴离子交换层析柱、Hiload Superdex 75凝胶层析柱对靶蛋白进行纯化。TSA法测定GrpE热稳定性,气相扩散法获得蛋白质晶体。结果重组构建质粒pW28-GrpE可以在表达菌E.coli B834中获得可溶性上清表达。GrpE蛋白具有较高纯度(95%以上),目的蛋白在溶液中以二聚体形式存在。发现重组GrpE蛋白在20 mM盐浓度、pH6.0缓冲液中有较高热稳定性。获得衍射能力为5A的蛋白质晶体。结论 利用蛋白质表达纯化的经典技术,获得了高表达、高纯度的GrpE蛋白。为下一步蛋白质晶体的优化及相关基础研究奠定了基础。