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本文归纳总结了高效毛细管电泳的分离模式、基本原理,及其在中药成分分析和中药活性成分筛选中的应用及研究进展。在此基础上,运用高效毛细管电泳法对某些药物活性成分的分离分析和抗氧化活性筛选方法进行了研究,完成了以下工作:
1、以高效毛细管电泳为分离检测手段,用水杨酸捕获Fenton反应产生的羟自由基(·OH),以12mmol/L硼砂-3mmol/LSDS-5%(v/v)乙腈缓冲液(pH8.55)为运行电解质,建立了一个同时分离测定阿魏酸、绿原酸、咖啡酸、水杨酸及水杨酸的二羟基衍生物的毛细管区带电泳(CZE)法。并以水杨酸浓度为指标,用该方法作为有机酚酸类物质的抗氧化活性筛选方法,对阿魏酸、绿原酸、咖啡酸及含有该类化合物的某些中药材的初提物清除·OH的活性进行了研究。此方法未见文献报道,并具有高效、快速、简便、准确和灵敏的特点,用该方法所得结果与文献报道基本一致,证明该法有作为有机酚酸类物质抗氧化活性筛选方法的应用价值。
2、以高效毛细管电泳为理论依据,在详细优化了分离测定条件后,建立了一个同时分离测定芦丁、槲皮素及DPPH·的毛细管区带电泳(CZE)方法。选择自由基清除剂芦丁和槲皮素的浓度为指标,用该方法研究了芦丁和槲皮素对DPPH·的清除率,所得结果与文献报道一致,证明该方法可以作为药物活性成分抗氧化活性的筛选方法。
3、在对缓冲液浓度、pH值及电泳仪器条件等参数进行优化后,以25mmol/L硼砂溶液(pH10.80)为运行电解质溶液,建立了一个在13min内同时分离测定鬼臼毒素和4,-去甲基鬼臼毒素的高效毛细管区带电泳方法,并用此方法对桃儿七根和八角莲根、茎、须、叶中鬼臼毒素(PPT)、4-去甲基鬼臼毒素(DMEP)的含量进行了分析测定。该方法未见文献报道,具有简单、快速、灵敏度高、重现性好的优点,其建立为鬼臼类植物中鬼臼毒素及其衍生物的分离分析提供了一种新的分析方法。
4、以茶叶中具有生物活性并对茶叶的品质有一定影响的咖啡因、可可碱和维生素C为对象,在优化了分离测定条件后,以20mmol/L硼砂溶液(pH9.93)为运行电解质,建立了一个未见文献报道的测定茶叶及茶饮料中咖啡因、可可碱和维生素C的高效毛细管区带电泳方法,考察了方法的精密度和重现性。结果表明,该方法可以在15min内实现茶叶及茶饮料中这三种组分的同时分离测定,并具有快速、简单、灵敏和精密度较好的特点,有一定的应用前景。