背景膀胱癌是世界范围内男性中第7位常见恶性肿瘤,女性第17位常见恶性肿瘤。作为最常见的膀胱癌亚型,膀胱移行细胞癌约占所有膀胱癌的90%,浸润和转移是导致患者死亡的主要原因。肿瘤的转移过程包括:侵袭相邻组织,渗透进入淋巴/血管系统,脱离原发灶,蔓延至附近或远处特定部位之后,经过侵袭、增殖、血管重塑等过程形成新的转移性病灶。虽然目前膀胱癌的诊断和治疗研究取得了很大进步,但是其复发、浸润、转移的机制尚不明确。大量研究发现,转化生长因子β1(Transforming growth factor beta 1,TGFβ1)和Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)信号通路与肿瘤的侵袭和转移过程密切相关,且有文献报道,在一些肿瘤细胞表面存在TLR4的表达,并且其激活可以上调TGFβ1细胞因子的表达,猜想TGFβ1和TLR4在肿瘤中可能存在关联,而目前有关两者间相互作用的报道甚少,本研究旨在探索与肿瘤侵袭和转移密切相关的TGFβ1与TLR4信号通路,在膀胱移行细胞癌T24细胞中的表达及两者之间的相互作用。目的研究TGFβ1和TLR4信号通路在膀胱移行细胞癌T24细胞中的表达及相互作用,从而为膀胱移行细胞癌发生发展机制的研究提供新思路。方法1.采用RT-PCR方法检测T24细胞分别在LPS(脂多糖)、rh TGFβ1(重组人源转化生长因子β1)刺激前后TLR4在m RNA水平的表达量变化。2.采用流式细胞术检测T24细胞分别在LPS、rh TGFβ1刺激前后TLR4在蛋白水平的表达量变化。3.采用RT-PCR方法检测T24细胞在LPS刺激前后TGFβ1在m RNA水平的表达量变化。4.采用ELISA方法检测T24细胞在LPS刺激前后TGFβ1在蛋白水平的表达量变化。结果1.在m RNA水平和蛋白质水平均检测到TLR4和细胞因子TGFβ1在T24细胞的表达。2.三种不同浓度LPS(1μg/ml、5μg/ml、10μg/ml)刺激T24细胞12h后,TLR4 m RNA相对表达量随着LPS浓度的升高而升高,组间相对表达量差异有统计学意义(χ2=12.26,P=0.007);与对照组相比,当LPS浓度为1μg/ml时即出现升高趋势,在10μg/ml时作用效果达到最强(P<0.001)。选用10μg/ml LPS刺激T24细胞不同时间之后,TLR4 m RNA相对表达量出现差异(χ2=13.78,P=0.02),并且在12h时达到最高(P<0.001)。在蛋白质水平,流式细胞术检测到LPS刺激后T24细胞膜表面TLR4蛋白表达升高,且具有统计学意义(t=﹣3.93,P=0.02)。3.三种不同浓度LPS(1μg/ml、5μg/ml、10μg/ml)刺激T24细胞12h后,TGFβ1 m RNA相对表达量随着LPS浓度的升高而升高,组间相对表达量差异有统计学意义(χ2=9.28,P=0.03);与对照组相比,当LPS浓度为5μg/ml时,其升高开始具有统计学意义(P=0.04),在10μg/ml时作用效果最为明显(P=0.003)。选用10μg/ml LPS刺激T24细胞不同时间之后,TGFβ1 m RNA相对表达量出现差异(χ2=15.12,P=0.01),并且在12h时达到最高(P<0.001)。在蛋白质水平,ELISA方法同样检测到LPS刺激后细胞因子TGFβ1蛋白表达升高,且具有统计学意义(t=﹣2.47,P=0.03)。4.三种不同浓度rh TGFβ1(1ng/ml、5ng/ml、10ng/ml)作用于T24细胞12h后,TLR4在m RNA水平有升高趋势,并且在5ng/ml时达到最高,但并不具有统计学意义(χ2=3.88,P=0.28)。之后选用5ng/ml rh TGFβ1刺激T24细胞不同时间之后,同样m RNA相对表达量变化并没有因为时间的变化而出现差异(χ2=9.69,P=0.08)。但在蛋白质水平,用5ng/ml rh TGFβ1刺激T24细胞24h后,流式细胞术检测到细胞膜表面TLR4蛋白表达明显升高,并具有统计学意义(t=-14.92,P<0.001)。结论1.膀胱移行细胞癌T24细胞可组成性表达TGFβ1和TLR4。2.膀胱移行细胞癌T24细胞中,在蛋白质水平上,TGFβ1和TLR4信号通路具有正相关促进作用。TLR4信号通路可以被其配体LPS激活,并能促进细胞因子TGFβ1的表达;TGFβ1可以促进TLR4蛋白的表达,但并不能影响TLR4在m RNA水平的表达量。