论文部分内容阅读
PeaT1是来源于极细链格孢菌(Alternaria tenuissima)的一种蛋白激发子,研究表明其具有促进植物生长和诱导植物产生系统获得抗性的功能。枯草芽孢杆菌本身无毒,对多种植物病原生物具有拮抗作用,是植物内常见的内生菌。本文利用PeaT1的诱导抗性和枯草芽孢杆菌的内生定殖特性构建了工程菌,检测确认了PeaT1蛋白在工程菌中的分泌表达,此工程菌能够在小麦、水稻和番茄植株体内定殖,并具有提高植物抗逆性,促进植物生长的活性。1.构建了PeaT1蛋白-枯草芽孢杆菌分泌表达载体。以枯草芽孢杆菌基因组DNA为模板,分别克隆和融合了组成型启动子P43和分泌效率较高的nprB基因信号肽编码序列,利用SOE法与peaT1基因融合,构建了大肠杆菌-枯草芽孢杆菌分泌表达载体pHY43N-peaT1,通过酶切和测序验证了载体的正确性。2.实现了PeaT1蛋白在枯草芽孢杆菌中的分泌表达。通过电击转化法,将载体pHY43N-peaT1转入枯草芽孢杆菌WB800,PCR和RT-PCR分析表明,peaT1基因在枯草芽孢杆菌中进行了正确的转录;SDS-PAGE和Western-blotting结果证明,在P43启动子的带动和nprB信号肽的引导下,peaT1基因在重组菌株中进行了正确的分泌表达。3.证明了工程菌WB800-PeaT1能够在植物体内定殖。工程菌WB800-PeaT1的内生定殖测定表明,在枯草芽孢杆菌WB800中转入PeaT1后,对枯草芽孢杆菌在植物体内的定殖没有明显影响,工程菌可以在小麦、水稻体内至少存活30 d。4.生物活性分析表明,工程菌WB800-PeaT1能够促进小麦幼苗生长、提高小麦抗旱性、诱导番茄对灰霉病的抗性。工程菌处理小麦后,和原始菌株WB800相比,工程菌WB800-PeaT1的促生效果更加明显;其根系活力是WB800的1.4倍,抗旱综合指数从43.42.23%提高到63.94%;工程菌处理番茄幼苗,对灰霉病的诱抗效果达到70.07%。