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为了适应复杂多变的外部环境,植物形成了多种多样的信号转导途径,从而使细胞能够做出适当的反应。在这些机制中,其中丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)级联途径普遍存在于真核生物中。丝裂原活化蛋白激酶途径由三种信号转导分子组成,丝裂原活化蛋白激酶激酶激酶(MAPKKK),丝裂原活化蛋白激酶激酶(MAPKK),丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)。当细胞在应答刺激时,MAPKKK通过磷酸化作用激活MAPKK,后者则通过磷酸化激活MAPK。拟南芥基因组编码了60-80个MAPKKK,10个MAPKK,20个MAPK。已经有报道称MAPK级联途径参与了ABA信号转导过程,而对其是否参与ABA抑制主根生长仍不清楚。
本文鉴定并获得拟南芥中MAPKKK家族成员之一的T-DNA插入纯合突变体mapkkkx,并利用该遗传材料对MAPKKKX在ABA调控的主根生长过程中的作用进行分析。表型分析发现,与野生型相比,在不存在外源ABA时,突变体mapkkkx在主根伸长方面与野生型没有差别,而在50μM ABA处理的情况下,突变体的主根伸长是野生型的2倍多。因此我们认为突变体mapkkkx在主根伸长方面对ABA不敏感。但是其他激素和胁迫的处理没有显示出这种差别。RT-PCR的结果显示ABA可抑制MAPKKKX的转录,且MlAPKKKX调节了ABA相关基因的表达。为了确定该突变体的表型是由MAPKKKX引起的,我们构建了回补载体和超表达载体。瞬转GFP的结果证明MAPKKKX定位于细胞质中。酵母双杂实验的结果显示MAPKKKX能够与MKK1-MKK10发生相互作用。为了证实酵母双杂的结果,我们构建了双分子荧光互补的一系列载体。
以上的结果表明MAPKKKX参与了ABA调控的主根生长过程。