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目的了解mce基因及蛋白质序列的特征,并对其同源性进行分析,构建系统进化发育树,对鼻疽诺卡菌mce1操纵子6个mce蛋白的二级结构及其B细胞抗原表位进行预测;从鼻疽诺卡菌IFM10152基因组中扩增6个mce基因(mce1A-mce1F),构建6个mce基因的表达载体;诱导表达鼻疽诺卡菌mce1操纵子中的6个mce蛋白,并将诱导成功的蛋白进行纯化;将纯化后的蛋白进行复性,并进行侵袭功能的鉴定。方法从NCBI数据库中获取mce基因及氨基酸序列,利用生物信息软件Lasergene和MEGA对其进行分析并构建进化树;综合BepiPred法、可塑性方案、抗原性方案、表面可及性方案、亲水性方案以及二级结构对6个mce蛋白进行B细胞抗原表位预测;采用PCR技术扩增6个mce基因,利用基因重组技术构建表达载体;利用IPTG进行诱导表达,超声裂解后利用SDS-PAGE鉴定其表达形式,将获得的蛋白利用His Bind蛋白纯化试剂盒进行纯化,并通过透析法对纯化后的蛋白进行复性;利用乳胶微粒包被复性后的蛋白,与HeLa细胞共同培养,收集细胞后,利用透射电子显微镜观察侵袭结果。结果(1)鼻疽诺卡菌mce1操纵子6个mce基因之间的相似性为40.1%~54.6%,不同菌之间mce蛋白具有一定的同源性;(2)鼻疽诺卡菌mce1操纵子6个mce蛋白均含有一个跨膜结构,二级结构以不规则卷曲为主,mce1A、mce1D、mce1E蛋白均含有6个B细胞抗原表位mce1B蛋白含有7个B细胞抗原表位,mce1C蛋白含有2个B细胞抗原表位,mce1F蛋白含有10个B细胞抗原表位,且大多位于蛋白质C-端;(3)成功扩增了6个mce基因,并构建了重组质粒pET30a-mce1A、pET30a-mce1B、pET30a-mce1C、pET30a-mce1D、pET30a-mce1E、pET30a-mce1F,成功诱导表达了mce1A、mce1C、mce1D、mce1E蛋白,其中mce1A、mce1C蛋白的表达量较低,mce1D、mce1E则获得了大量的表达,各蛋白均以包涵体的形式存在;(4)成功纯化了mce1A、mce1D、mce1E蛋白,并对mce1D、mce1E蛋白进行了复性;(5)经乳胶微粒包被后的mce1D、mce1E蛋白侵袭HeLa细胞,结果发现二者均能进入到HeLa细胞内。结论鼻疽诺卡菌mce1操纵子不同mce蛋白之间及不同菌的mce蛋白之间具有一定的同源性;鼻疽诺卡菌mce蛋白为膜蛋白,大部分结构位于膜外,且具有多个潜在的B细胞抗原表位;鼻疽诺卡菌mce蛋白的诱导表达受基因本身及载体的影响,同时也与IPTG浓度及诱导时间有关;获得了纯化后的蛋白,进行复性后验证了mce1D、mce1E蛋白具有侵袭功能。