奶水牛和生猪是国家鼓励和优先发展的两大产业。开发提高水牛繁殖力和猪生长速度的新技术,是促进上述两大产业发展的重要举措。为了：①探讨水牛卵泡发育的调节机制,促进水牛繁殖新技术的发展；②优化生长抑素基因免疫程度,分析该疫苗的生物安全性,促进该疫苗的推广应用本研究利用。因此本研究从褪黑激素对水牛卵泡颗粒细胞体外调节、生长抑素基因免疫程序优化与安全性评定等角度开展研究,主要内容和结果如下：1.褪黑激素对水牛颗粒细胞的调节及其作用机制研究褪黑激素(MLT)受光信号控制,对生殖系统、特别是卵巢功能具有调节作用。MLT对水牛卵泡发育是否有调节作用,尚不清楚。本实验从颗粒细胞的褪黑激素受体表达、调节及外源MLT对水牛颗粒细胞凋亡、增殖与激素分泌等方面进行了研究,主要内容和结果如下：(1)提取水牛颗粒细胞RNA,经反转录获得细胞cNDA,并成功扩增出MT1受体特异性条带,表明水牛颗粒细胞表达褪黑激素受体。(2)将水牛颗粒细胞用含低(0.1nM)、中(1nM)、高(100nM)剂量MLT的培养液处理24小时,在mRNA水平检测MTl及相关受体的表达情况,结果发现,MT1受体表达在各浓度MLT作用下明显上调,FSH和GnRH受体表达显著下降,LH受体表达在高剂量组显著上调,中、低剂量组无显著变化。(3)用MLT处理水牛颗粒细胞24h后,用流式细胞仪检测细胞凋亡及增殖情况,发现与对照组相比,高剂量组的细胞凋亡显著减少,中、低剂量组组无明显差异；另外,中、高剂量组细胞增殖明显高于对照组,低剂量组与对照组无显著差异。用Western Blot检测细胞相关调控因子,发现中、高剂量组中bcl2表达显著上调,高剂量组中caspase3、p21和p27表达明显下降,这与流式检测结果一致。测定培养液中雌激素和孕激素浓度,发现高剂量组的孕激素分泌明显减少,而各组的雌激素分泌量变化不明显。2.生长抑素基因疫苗免疫程序及安全性研究本研究选择45日龄杜长大三元杂交猪25头,分成5组,从免疫原(Pcs/2SS)剂量(0.5mg,1.0mg,2.0mg)和免疫方式(电转化和肌肉注射)以及安全性评价等方面着手,比较了各种剂量、两种给药方式的免疫和促生长效果,分析了目的基因整合情况,结果如下：(1)免疫质粒后,实验组猪均有抗体产生,表明疫苗引发了机体的免疫应答。在初次免疫和加强免疫第2周,抗体阳性猪比例最高,加强免疫后体内抗体水平的维持时间与初次免疫相比明显增长。同时,在加强免疫后的第2周生长速度也达到高峰,但各组动物激素内分泌水平与对照组并无差异。(2)试验猪达到出栏体重后屠宰,采集脂肪和肌肉,提取组织DNA,检测质粒整合,结果显示各组均为阴性,说明质粒未整合到动物基因组内,因而认为该疫苗是安全的。