水稻(Oryza sativa L.)籼粳杂种花粉不育基因Sb的图位克隆

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本文利用RGP,NCBI等数据库中的相关信息对花粉不育基因座Sb作了进一步的精细定位,并对其中的2个ORF进行序列分析并通过功能互作进行验证,同时还利用RNA干涉方法对基因本身的功能进行了鉴定。主要结果如下:根据本研究的测序结果和利用国际公共数据库公布的水稻基因组序列信息,发展了9个与Sb紧密连锁的插入/缺失(Indel)标记和4个SNP标记。利用粳稻台中65(T65,SbjSbj)和近等基因系(E2,SbiSbi)构建的F2群体(包含687个体)对Sb基因座进行了初步定位。构建了覆盖Sb座位的基于IRGSP数据库的电子物理图谱。对覆盖目的基因的区域进行了预测,发现共有 11个开放阅读框。利用RT-PCR对ORF19,ORF20进行了表达分析,ORF19,ORF20在穗部都有表达。用Northern blotting对ORF19和ORF20表达的组织特异性进行分析。对T65,E2及携带广亲和等位基因的普通野生稻的ORF19和ORF20的基因组序列进行了测序比较。将粳型、籼型和广亲和型的ORF19和ORF20包含启动子区,编码区和3’非翻译区的PCR片断克隆到植物转化载体pCAMBIA1300中,分别转化了E2、T65和F2,目前已获得转化苗。针对ORF19和ORF20选取目的片段分别构建了RNA干涉载体,并对水稻进行了农杆菌介导的遗传转化,获得了一批RNA干涉转化苗。
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