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目的：通过研究5-羟葵酸阻断缺血后处理大鼠心肌线粒体蛋白质的表达变化,寻找心肌缺血再灌注损伤的标识蛋白和保护蛋白,为科研和临床提供依据。方法：1.建立Langendorff大鼠离体心脏缺血再灌注损伤模型：雄性SD大鼠(N=24)随机分为正常组(Nor)、缺血再灌注损伤组(I/R)、缺血后处理组(IPO)、5-羟葵酸阻断缺血后处理组(5-HD+IPO),每组6只；各组灌注方案：Nor组：持续灌注Kerbs-Henseleit缓冲液(K-H液)120min。I/R.IPO及5-HD+IPO组于缺血前灌注K-H液平衡20min,灌注4℃St. Thomas停跳液缺血40mmin,而后分别按以下方案续灌：I/R组：灌注K-H液60min; IPO组：复灌前给予K-H液复灌10s、停灌10s循环6次,继而K-H液58min;5-HD+IPO组：复灌前依次灌注100μmol/L5-羟葵酸3min、K-H液复灌10s停灌10s循环6次、K-H液55mmin。记录各组平衡末和续灌末心率(HR)、左室发展压(LVDP).左室舒张末压(LVDEP)以及最大dp/dt等心功能的变化,并收集心室肌组织；2.差速离心联合Nycodenz密度梯度离心获取大鼠心肌线粒体,通过透射电镜检测线粒体的纯度、完整性和富集度；3.对IPO与5-HD+IPO组心肌线粒体蛋白行双向凝胶电泳(2-DE),扫描获取数字化图像,采用PD-Quest8.0软件查找差异表达蛋白点,并将蛋白点挖取进行质谱分析后获得蛋白相关信息；4.利用Western blot回复验证关键差异蛋白的表达趋势,以判断2-DE结果的可靠性。结果：1.透射电镜证实Nycodenz不连续密度梯度离心法使线粒体的纯度进一步提高；2.各组心功能指标在平衡末无明显差异,灌注末Nor组及IPO组的心功能明显好于I/R组和5-HD+IPO组(P<0.05),5-HD+IPO组与I/R组间心功能差异无统计学意义；3.两组蛋白进行双向电泳、图像扫描、软件分析后得到表达差异在2倍以上的蛋白点5个,质谱分析成功获得差异蛋白信息；4.通过分析,在5-HD+IPO组有2个蛋白表达升高：SSP6804(线粒体内膜蛋白IMMT)、SSP7803(葡萄糖调节蛋白75,Grp75),表达下降的3个蛋白分别为SSP1609(二氢硫辛酸脱氢酶,丙酮酸脱氢酶复合体组成部分,DLDH)、SSP2107(rCG44606)、 SSP3002(ATP合酶,ATPsynthase)。5. Western blot验证DLDH、Grp75在两组中的表达情况,在5-HD+IPO组中DLDH较IPO组下降,Grp75较IPO组上升,这些表达变化与2-DE的结果一致且差异有统计学意义(P<0.05)。结论：1.缺血后处理能明显改善大鼠心脏功能,而5-羟葵酸可部分阻断其保护作用；2.5-HD阻断缺血后处理后：①DLDH表达下调,推测缺血再灌注损伤激活PDK(丙酮酸脱氢酶激酶)促使DLDH磷酸化而下调；②ATP合酶表达下调,其原因可能是膜电位的改变致使ATP合酶亚基的旋转过程受损；③Grp75表达上调,推测可能是线粒体Ca2+超载、活性氧的生成增加等因素激活了热休克转录因子,促进Grp75的基因转录和蛋白表达；④IMMT表达上调,可能是由于线粒体内H+增加、ATP合成障碍、醛类物质堆积等原因,促使蛋白质发生了代偿性的升高；3.差速离心联合Nycodenz不连续密度梯度离心,可获取较高纯度的心肌线粒体。