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胰蛋白酶抑制剂(trypsin inhibitor,TI)可以与胰蛋白酶发生结合反应,调控酶的活性,具有治疗胰腺炎、脑水肿和抗肿瘤等广泛的生物学活性。动植物源TIs通常是蛋白多肽类物质,临床中易产生不良反应或抗原反应。而微生物源TIs大多是一些小分子类物质,更具广泛的应用价值和医学前景。本论文通过酪蛋白平板法从1500株海洋细菌和放线菌中筛选胰蛋白酶抑制剂产生菌,对筛选获得的菌株进行16S rRNA分子鉴定,分析胰蛋白酶抑制剂产生菌的菌属分布及其亲缘关系。再经酪蛋白紫外吸光光度法和BAPNA法复筛确定产抑制剂稳定的菌株,同时对抑制剂活性最高的菌株进行菌种鉴定、生理生化检测和发酵,利用硫酸分级沉淀、sephadex G-50层析柱、DEAE-cellulose-52离子交换柱分离纯化胰蛋白酶抑制剂。获得的抑制剂粗纯品经紫外全波长扫描、HPLC分析、薄层层析、纸层析及成分初步鉴定,确定抑制剂的成分。最后在测定抑制剂与胰蛋白酶作用后酶促反应速率曲线和1/S、1/V双倒数曲线,计算Km和Vm的值,确定抑制剂对胰蛋白酶的抑制类型。结果显示:酪蛋白平板法初筛获得17株胰蛋白酶抑制剂产生菌,主要分布在链霉菌属,同时在微杆菌属、粘着箭菌属、芽孢杆菌属、假交替单胞菌属和弧菌属中也有分布。复筛获得8株产抑制剂稳定的菌株,其中放线菌FY57的发酵液对胰蛋白酶的抑制作用最强,抑制率为90%左右。FY57菌株经鉴定为抗生链霉菌,分离纯化得到的胰蛋白酶抑制剂为多肽类物质,含有精氨酸、酪氨酸和醛基。FY57胰蛋白酶抑制剂与胰蛋白酶作用后,酶促反应曲线的Km值不变,Vm值变小,确定FY57胰蛋白酶抑制剂的抑制类型为非竞争性抑制。