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目的：
探讨氟西汀急慢性处理对原代培养的星形胶质细胞内pH值(pHi)的调节作用及其由5-HT2B受体介导激活NHE-1的细胞信号转导通路机制。
方法：
1、稳态pHi检测10μM氟西汀急性处理(30分钟)或者慢性处理(1d、3d或7d)的星形胶质细胞,采用荧光探针技术检测细胞稳态的pHi。
2、酸负载星形胶质细胞连续进行一次20mMNH4Cl时间为2分钟的酸负载,分别检测酸恢复前两分钟pHi的变化速率(△pH/△t)。
3、Westernblot和免疫沉淀选取培养于60mm培养皿中的成熟星形胶质细胞,用10μM氟西汀慢性处理(3d、1w、2w、4w)后,收集细胞,检测细胞内NHE1蛋白表达水平。
结果：
1、稳态pHi检测与对照组相比,10μM氟西汀急性处理后能引起细胞稳态pHi显著升高,差异有统计学意义(P＜0.05),持续10分钟后恢复基线水平;与对照组相比,10μM氟西汀作用3天和7天均能明显提高细胞pHi值～0.4,差异具有统计学意义(P＜0.05),而慢性作用1天后的细胞pHi值无明显变化;在U0126(MEK选择性抑制剂)或SB204741(5-HTz8受体选择性抑制剂)存在的条件下,可以抑制氟西汀急慢性处理后的细胞pHi的升高。
2、酸负载与第一次酸恢复前两分钟检测的△pHi/△t值相比,实验组细胞的△pHi/△t值有显著性的升高,差异有统计学意义(P＜0.05)。抑制剂组细胞的△pHi/△t值无明显变化。
3、Westernblot和免疫沉淀10μMFlu急性作用30秒、1分钟、5分钟、10分钟、20分钟、40分钟和60分钟,细胞内p-RSK在20分钟和40分钟时明显升高,60分钟时下降。10μMFlu急性作用20分钟,细胞内p-RSK升高。200nMSB204741(5-HT2B受体抑制剂)部分抑制p-RSK升高,而10μMU0126(MEK抑制剂)可抑制p-RSK升高。10μMFlu急性作用30秒、1分钟、5分钟、10分钟、20分钟、40分钟和60分钟,细胞内p-NHE1逐渐升高,在20分钟和40分钟时最明显,60分钟时下降。
结论：
小鼠星形胶质细胞中,氟西汀可以与5-HT2B受体结合通过MEK-ERK-RSK细胞信号转导通路激活NHE-1来提高细胞pHi值。