PP242对IGF-1诱导的人晶状体上皮细胞增殖的影响

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目的:探讨PP242对IGF-1(胰岛素样生长因子-1)诱导的人晶状体上皮细胞(HLECs)增殖的影响。  方法:1、对HLEC系SRA01/04进行体外培养及传代后,将HLECs分为A、B、C、D组。A组:加入不同浓度的PP242100、500、750、1000、2000nmol/l。B组:IGF-110ng/ml+PP242100nmol/l、IGF-110ng/ml+PP242500nmol/l、IGF-110ng/ml+PP242750nmol/l、IGF-110ng/ml+PP2421000nmol/l、IGF-110ng/ml+PP2422000nmol/l。C组:加入不同浓度的RAPA100、300、500、1000、2000ng/ml。D组:IGF-110ng/ml+RAPA100ng/ml、IGF-110ng/ml+RAPA300ng/ml、IGF-110ng/ml+RAPA500ng/ml、1GF-110ng/ml+RAPA1000ng/ml、 IGF-110ng/ml+RAPA2000ng/ml。A、C组同时分别设立对照组(细胞和无血清培养液)和空白组(只含无血清培养液),B、D组同时分别设立对照组(IGF-110ng/ml)和空白组(细胞和无血清培养液),各组HLECs分别培养24h后,采用CCK8法测定吸光度(OD)值,并计算各组药物对HLECs的抑制率。2、将HLECs分为DMSO组(S0)、IGF-110ng/ml组(S1)、IGF-110ng/ml+RAPA2000ng/ml组(S2)、IGF-110ng/ml+PP2421000nmol/l组(S3)、IGF-110ng/ml+PP2422000nmol/l组(S4),分别加入HLECs培养基中培养24h后,采用RT-PCR方法检测mTOR、p-S6K1、4E-BP1、p-AKT的mRNA表达及Western blot方法检测p-S6K1、p-AKT Ser473的蛋白表达。  结果:1、CCK8结果:A、B组随着PP242浓度的增加,抑制率逐渐增高,差异有统计学意义(P<0.01)。B组中IGF-110ng/ml与空白组相比,OD值明显增大,差异有统计学意义(P<0.01)。C、D组随着RAPA浓度的增加,抑制率逐渐增高,差异有统计学意义(P<0.01)。D组中IGF-110ng/ml与空白组相比,OD值明显增大,差异有统计学意义(P<0.01)。2、RT-PCR检测结果:S1组与S0组相比mTOR、p-S6K1、4E-BP1、p-AKT mRNA表达水平增强(P<0.05)。S2组与S0组相比,mTOR、p-S6K1、4E-BP1mRNA表达水平明显减弱,p-AKTmRNA表达水平明显增强(P<0.05)。S3、S4组与S0组相比,mTOR、p-S6K1、4E-BP1、p-AKT表达水平明显减弱(P<0.05);3、Western blot检测结果:S1组与S0组相比,p-S6K1、p-AKTSer473蛋白表达水平增强(P<0.05)。S2组与S0组相比,p-S6K1蛋白表达水平明显减弱,p-AKT Ser473蛋白表达水平明显增强(P<0.05)。S3、S4组与S0组相比,p-S6K1、p-AKT Ser473蛋白表达水平明显减弱(P<0.05)。  结论:IGF-1促进HLECs的增殖。PP242、RAPA对IGF-1诱导的人晶状体上皮细胞的增殖有抑制作用,其作用强度呈浓度依赖性。PP242不仅可通过下调p-AKTSer473蛋白的表达,也可通过下调p-S6K1蛋白的表达,抑制HLECs的增殖。
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