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目的： 眼内黑色素瘤是成人眼内主要的原发性恶性肿瘤，对患者的视力及生命均构成严重威胁。目前缺乏控制生长和转移的有效方法。β-榄香烯是从中药香茅草中提取的有效抗癌成分，具有抗肿瘤谱广，毒副作用轻微的突出优点;目前临床广泛用于恶性胸膜腔积液、肺癌、消化道肿瘤以及其他浅表性肿瘤;但其作用机制尚不明确。故本实验旨在现有肿瘤研究的基础上探讨β-榄香烯能否抑制小鼠B16F10黑色素瘤细胞的生长，能否抑制小鼠眼内种植瘤的生长，以及潜在的作用机制，以寻找一种新的能够有效控制这一眼内恶性肿瘤生长和转移的治疗方法。实验选用小鼠B16F10黑色素瘤细胞系作为研究对象，分三部分进行: 1、体外实验:探讨β-榄香烯对小鼠B16F10黑色素瘤细胞生长和转移的抑制作用及对urokinase-type plasminogen activator(uPA)、uPA receptor(uPAR)、 Matrixmetalloproteinase-2(MMP-2)、MMP-9表达的影响。 2、体内实验:应用小鼠B16F10黑色素瘤细胞建立小鼠眼内种植黑色素瘤模型，探讨β-榄香烯对小鼠眼内种植瘤生长的抑制作用及对uPA、uPAR、MMP-2、MMP-9表达的影响。 3、分子机制:在前两部分实验基础上，应用特异性ERK1/2通路抑制剂U0126，深入探讨β-榄香烯对小鼠B16F10黑色素瘤细胞转移的抑制作用、对uPA、uPAR、MMP-2、MMP-9 mRNA和蛋白表达的影响以及对通路ERK1/2磷酸化表达的影响。 方法： 1、体外实验部分:首先通过MTS法检测β-榄香烯对小鼠B16F10黑色素瘤细胞生长的抑制作用、初步摸索出用于后续实验的β-榄香烯作用浓度，依据上述结果应用Transwell法、划痕实验检测β-榄香烯对小鼠B16F10黑色素瘤细胞转移的抑制作用，应用Real-timePCR、WesternBlot的方法检测β-榄香烯对uPA、uPAR、MMP-2、MMP-9 mRNA和蛋白表达的影响。 2、体内实验部分:实验选用SPF级C57BL/6J小鼠，在手术显微镜下直视操作，应用小鼠B16F10黑色素瘤细胞建立小鼠眼内黑色素种植瘤模型。建模后3天观察小鼠眼内情况，分别给予眼周注射β-榄香烯和眼周注射空白乳剂，实验周期结束后摘取小鼠眼球，通过对肿瘤大小测量、Real-time PCR、免疫组化法、Western Blot法检测β-榄香烯对肿瘤生长的影响及对uPA、uPAR、MMP-2、MMP-9 mRNA和蛋白表达的影响。 3、分子机制:在体内外实验的基础上，应用特异性ERK1/2通路抑制剂U0126后，通过Transwell法检测β-榄香烯对小鼠B16F10黑色素瘤细胞转移的抑制作用、Real-time PCR检测β-榄香烯对uPA、uPAR、MMP-2、MMP-9 mRNA表达的影响、Western Blot法检测β-榄香烯对uPA、uPAR、MMP-2、MMP-9蛋白表达以及对通路ERK1/2磷酸化表达的影响。 结果： 1、体外实验结果:MTS结果显示，在24h、48h、72h时，随着β-榄香烯作用时间的延长、浓度的增加，对小鼠B16F10黑色素瘤细胞存活率的抑制增强，抑制浓度始于100μM; Transwell法和划痕实验结果显示β-榄香烯能够抑制小鼠B16F10黑色素瘤细胞的转移;Real-time PCR结果显示β-榄香烯在mRNA水平抑制uPA、uPAR、MMP-2、MMP-9的表达;免疫组化法和Western Blot法显示β-榄香烯在蛋白水平抑制uPA、uPAR、MMP-2、MMP-9的表达。 2、体内实验结果显示:β-榄香烯作用后的肿瘤大小明显减小;Real-time PCR结果显示β-榄香烯在mRNA水平抑制uPA、uPAR、MMP-2、MMP-9的表达;免疫组化法和Western Blot法显示β-榄香烯在蛋白水平抑制uPA、uPAR、MMP-2、MMP-9的表达。 3、分子机制研究显示:β-榄香烯、U0126均能抑制小鼠B16F10黑色素瘤细胞的转移、下调uPA、uPAR、MMP-2、MMP-9表达;两者联合作用后，增强了作用效果;随着β-榄香烯作用时间的延长、药物浓度的增加对磷酸化ERK1/2表达的抑制作用增强。 结论： 1、通过MTT、Transwell、划痕实验、免疫组化、PCR、Western Blot检测手法证实β-榄香烯通过下调uPA、uPAR、MMP-2、MMP-9表达而发挥抑制B16F10黑色素瘤细胞生长和转移的作用。 2、通过对肿瘤大小的测量、免疫组化、PCR、Western Blot检测手法证实β-榄香烯通过下调uPA、uPAR、MMP-2、MMP-9表达而发挥抑制眼内种植瘤生长的作用。 3、β-榄香烯通过调控ERK1/2信号通路而下调uPA、uPAR、MMP-2、MMP-9表达，进而抑制小鼠B16F10黑色素瘤细胞的生长和转移。