骨碎补/聚乳酸—羟基乙酸共聚物微囊的实验研究

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目的:提取骨碎补中总黄酮成分,制备骨碎补总黄酮/聚乳酸-羟基乙酸共聚物(DR/PLGA)微囊,并对微囊制备条件进行优化,制备出微囊粒径较小、分散均匀、包封率较高的微囊。CCK-8法观察DR/PLGA微囊对小鼠成骨细胞株MC3T3-E1生长的影响。方法:1、取烫制骨碎补经粉碎后,置于回流提取装置中提取得到的骨碎补总黄酮。以柚皮苷为标准品,对所提取的骨碎补中总黄酮含量进行考察。2、在一定制备条件下,按照乳化溶剂挥发法制备DR/PLGA微囊,于PLGA浓度、搅拌速度、初乳乳化时间、水油比值等不同单因素条件下利用显微镜观察微囊大体形态、扫描电镜及透射电镜观察微囊表面形态、粒径分析仪观察微囊粒径分布宽度、分光光度计测量微囊中总黄酮包封率对微囊进行考察,筛选出微囊粒径较小、分散均匀、包封率较高的DR/PLGA微囊。3、将DR/PLGA微囊在无菌条件下与小鼠成骨细胞株MC3T3-E1共同培养,CCK-8法观察DR/PLGA微囊对细胞增殖的影响。结果:1、通过紫外分光光度计检测,浸膏中总黄酮含量为9.95%。2、分别于PLGA浓度、初乳搅拌速度、初乳乳化时间、水油比值四种单因素条件下考察其对微囊形态、分散情况、微囊包封率的影响。①显微镜下对微囊大体形态及粒径分布观察发现当PLGA浓度小于140mg/mL、搅拌速度在2000-4000rpm、初乳乳化时间在4-6分钟、初乳水油比值大于1:10时微囊分散良好,粒径分散较均匀,粒径分布较窄。②通过紫外分光光度计测量微囊中骨碎补总黄酮包封率来衡量微囊质量,结合显微镜观察结果。确定最佳工艺参数为:PLGA溶液浓度140mg/mL,匀浆机搅拌速度2000rpm,初乳乳化时间6分钟,水油比比值1:15。③优化工艺下所制备的微囊显微镜下观察显示微囊分布均匀,粒径分布宽度较窄,扫描电镜及透射电镜观察所见微囊呈圆形,边缘较规则。粒径扫描显示微囊平均粒径为789.8±712.3nm,分布相对较窄,基本小于5μm。紫外分光光度计所测微囊平均包封率为47.72%。3、将制备好的DR/PLGA微囊与小鼠成骨细胞株MC3T3-E1共同培养,发现当微囊浓度为0.1mg/mL、0.5mg/mL时,细胞活力无明显增加。当微囊浓度大于1mg/mL时,随微囊浓度的增加,吸收度A450值也增大。统计学具有意义。结论:本实验提取了骨碎补中有效成分总黄酮,并制备了DR/PLGA微囊,并对其制备条件进行优化,制备出粒径较小、分散较均匀、粒径分布宽度较窄、包封率较高的DR/PLGA微囊
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