盾壳霉产孢相关基因的克隆及液体产孢条件的优化

来源 :华中农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:caicai_0326
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)是重要的植物病原真菌,给油菜、向日葵等作物的生产造成了巨大的经济损失。盾壳霉(Coniothyrium minitans)是核盘菌的重寄生真菌,是作物菌核病的重要生防菌。本文对T-DNA标记插入突变产孢缺陷型菌株ZS-1T16229中相关基因进行了部分克隆及序列分析,并对ZS-1菌株在液体振荡培养下促进产孢的条件进行了探讨,结果如下:从盾壳霉ZS-1菌株T-DNA标记插入突变体库中筛选出的菌丝生长、产孢缺陷型突变株ZS-1T16229,以之为材料,采用TAIL-PCR技术对T-DNA标记插入位点右侧的基因组DNA进行了克隆,获得了大小为1131bp的DNA片段;对该基因组DNA片段进行了序列分析,并利用GenScan软件进行了阅读框(ORF)预测,结果表明该DNA片段中可能含有一个不完整的阅读框(324—1100nt),编码259aa。对推定蛋白的氨基酸序列进行了同源性比较(Blastp),发现该蛋白含有保守的Pex2-Pex12结构域,与真菌的过氧化物酶体蛋白PEX2有极高的同源性,如与烟曲霉(Aspergillus fumigatus Af293)的PEX2相同部位等同的氨基酸为59%,类似的氨基酸达74%。命名该基因为CMPEX2,证实T-DNA标记在ZS-1T16229中为单拷贝插入,破坏CMPEX2的后半部分。PEX2参与真菌的活性氧代谢,消解活性氧的毒害作用。研究发现,与出发菌株相比,突变体ZS-1T16229偏向于培养基质中生长,推定与缓解活性氧对菌体毒害作用有关,CMPEX2基因可能与ZS-1T16229的产孢缺陷型等表型相关。探讨了在马铃薯葡萄糖液体培养基(PDB)中添加少量琼脂粉(0.1‰-1.5‰w/v)对盾壳霉ZS-1菌株的生物产量及产孢的促进作用。研究发现,在PDB添加不同量的琼脂粉对ZS-1菌株的生物产量和产孢均有显著的促进作用。命名该液体培养基为PDB-1a,其中当琼脂粉的添加量为0.75‰时,综合效果最为理想,在此条件下,于100ml PDB中培养10d ZS-1菌株的生物产量达616.1±6.2mg,孢子产量为(6.1±0.1)×10~9个/100ml PDB-1a,与对照(PDB)相比,生物产量提高了40.4%,孢子产量提高了260.9%。以含0.75‰琼脂粉的PDB-1a为培养液,研究了ZS-1菌株生长和产孢时间动态、接种量和装液量对产孢的影响,并以琼脂粉的添加量、接种量和培养时间为影响因子,进行了正交实验并对结果进行了分析。发现ZS-1菌株生长速度加快,生物产量及产孢于第8d达到高峰,而对照中于第11d生物产量和产孢的高峰期,缩短3d;装液量对生长和产孢均有显著影响,其中于250ml三角瓶中添加100mlPDB-1a,菌株的生物产量达614.5±9.3mg,产孢达(6.2±0.2)×10~9个/100mlPDB-1a。接种量对菌株的生物产量和产孢有显著的影响,其中最佳接种量是6ml孢子悬液/100ml PDB-1a(孢子悬液的浓度为10~7孢子/ml PDB),此时,生物产量为619.1±10.8g,产孢量为(6.2±0.1)×10~9个/100ml PDB-1a。正交分析发现,在含0.75‰琼脂粉的PDB-1a为培养液、接种量为6ml孢子悬液/100ml PDB-1a(孢子悬液的浓度为10~7孢子/ml PDB)、培养时间为8d的综合条件下液体振荡培养,菌株生长和产孢最好。研究发现0.75‰PDB-1a对盾壳霉其它2个能在液体振荡培养条件下产孢的菌株(CM37和CM38)的生物产量和产孢都有显著的促进作用;对在液体振荡培养条件下不产孢的菌株Chy-1可以明显促进其生物产量的提高,但不能促使其产孢,表明PDB中添加少量的琼脂粉从本质上不能诱导盾壳霉产孢。研究还发现PDB-1a对草酸青霉(Penicillium oxalicum)、稻瘟病菌(Magnaporthe grisea)、木霉(Trichoderma spp)和禾谷镰孢菌(Fusarium.graminearum)等4种丝孢纲真菌的生长也有显著的影响。这表明在PDB中添加少量的琼脂粉对真菌于液体振荡培养下生长的促进作用可能具有普遍作用。本文对盾壳霉孢子形成的分子机理研究提供基因材料和思路;同时对该生防菌的规模化生产等深入研究有较重要的理论意义和实践价值。
其他文献
鸟儿想要飞起来,还必须借助一种神秘的力量,它是什么呢?“升力”的秘密牛顿早就发现了一种能让苹果掉下来的力——重力。你可能会说,重力也会将飞翔的鸟儿拉向地面哪。别忘了
期刊
在新课程初中数学教学过程中,构建积极有效的课堂教学氛围,最大限度的提高教学效果,是每一个数学老师经常谈及的话题。教学既是一门科学,又是一门艺术。在新课程背景下,广大数学教
鸟儿为什么能飞?首先要从它们的身体结构说起.rn轻盈的身体rn鸟儿的体重很轻.它们的骨头几乎是空心的,里面有很多骨柱相互交错,不仅轻便,还有一定强度.所有骨头的重量加起来,
期刊
体育报道勿忘友谊报道体育比赛不能忘了团结和友谊,无论是国内还是国际比赛,都应如此。但是,我们有些体育新闻和评论信口开河,忘记了友谊、团结。我曾在第14届世界杯足球报道中看到
由Magnaporthe grisea(Hebert)Barr.引起的水稻稻瘟病是一种世界性的真菌病害,对世界粮食产量有着重要影响。利用水稻生物多样性控制稻瘟病是近年稻瘟病防治研究的热点与焦点,在
?语文新课程标准?关于写作的评价说:要重视对作文的评改。要考察学生对作文内容、文字表达的修改,也要关注学生修改作文的态度、过程和方法。要引导学生通过自改和互改,取长补短
请下载后查看,本文暂不支持在线获取查看简介。 Please download to view, this article does not support online access to view profile.
期刊
让宝宝知道降落伞的名称,请宝宝给降落伞涂上自己喜欢的颜色,并学习按虚线连线。 Let the baby know the name of the parachute, please baby to parachute painted your
期刊
本文以耐感虫品种为材料,系统研究了在褐飞虱侵害对水稻蔗糖、可溶性糖、干物质和激素含量在根和冠的含量及其分配的影响,主要结果如下:1.褐飞虱侵害对水稻同化物(蔗糖、可溶
甘蔗螟虫又称甘蔗钻心虫,在国内外分布范围极其广泛,是我国甘蔗产区的主要害虫。为了明确广西蔗区甘蔗螟虫的种类及发生规律,作者在南宁市武鸣县甘蔗种植区进行了系统的调查,