抑郁症是一种常见的精神障碍,心境低落以及快感缺失是其主要临床特征。抑郁患者不仅情绪低落,同时伴有睡眠不安、食欲不佳、对日常活动失去兴趣、精神无法集中、自卑以及自杀念头等。据统计,2015年美国至少有1610万人经历过抑郁发作,抑郁的发病率已达6.7%[1]。目前临床常用的抗抑郁药虽有一定的效果,但普遍存在临床治愈率低、后遗症状突出、复发率高、功能损害突出等问题。从中医学的角度寻找抑郁症的治疗方法并对其机制进行研究可以有效的完善补充抑郁症治疗的方法,为抑郁症的治疗提供更多可供选择的途径。中药具有多途径、多层次、多靶点的特点,用来治疗抑郁症可以取得良好效果。中医认为抑郁的基本病机是“肝郁”,临床以疏肝为基本治法。同时,中医注重辩证论治,明清时期名医汪机的“调补气血,固本培元”的治疗思想,以及当代王永炎、黄世敬的“培元开郁法”,体现出整体观和辩证论治的优势,有益于解决目前抗抑郁药物在临床上出现的敏感性低、耐受性差以及易发生毒副作用等问题。基于此,本实验以天丝饮和四逆散的合方即培元解郁方为研究对象,评价其抗抑郁的效果并研究其作用机制。课题前期采用相关动物模型,已对天丝饮、四逆散及其合方培元解郁方的作用及机制进行了初步研究,在此基础上本实验采用常用药效学模型对培元解郁方进行综合评价。1.培元解郁方对小鼠利血平拮抗实验的影响目的:研究培元解郁方对利血平拮抗(RR)模型小鼠的抗抑郁作用。方法:利血平2.5mg/kg小鼠腹腔注射建立RR模型,观察培元解郁方对RR模型小鼠的体温、眼睑下垂、出圈率的影响。结果:培元解郁方各剂量均能拮抗RR模型小鼠的体温下降(P<0.01),此外高剂量还可改善利血平引起的眼睑下垂、运动不能的状况(P<0.05),中剂量组可改善运动不能的状况(P<0.05)。结论:培元解郁方对RR模型具有抗抑郁样作用。2.培元解郁方对急性应激模型小鼠的影响目的:研究培元解郁方对急性应激模型的抗抑郁作用,并探讨作用机制。方法:小鼠强迫游泳(FST)建立急性应激模型,观察培元解郁方对FST模型强迫游泳不动时间的影响,采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测FST模型小鼠脑中5-羟色胺(5-HT)、去甲肾上腺素(NA)及吲哚胺-2,3-双加氧酶(IDO)的含量。结果:培元解郁方中、低剂量均可缩短急性应激模型小鼠不动时间(P<0.05、P<0.01),且显著增加脑中5-HT、NA的含量(P<0.05、P<0.01),各组IDO含量无统计学差异。结论:培元解郁方对急性应激模型具有抗抑郁作用,其机制可能与增加急性应激模型小鼠脑中单胺类神经递质5-HT、NA含量有关。3.培元解郁方对慢性应激模型小鼠的影响目的:研究培元解郁方对慢性应激模型小鼠的抗抑郁作用,并探讨其作用机制。方法:采用长期束缚加噪声刺激建立慢性应激模型,观察培元解郁方对慢性应激模型小鼠强迫游泳不动时间的影响,采用ELISA检测其脑中5-HT、IDO的含量,并采用荧光定量PCR检测其脑中IDO mRNA的表达情况。结果:培元解郁方高、中、低剂量组均可不同程度的缩短慢性应激模型小鼠强迫游泳不动时间、增加脑组织中5-HT的含量、降低IDO的含量并上调IDO mRNA的表达(P<0.05)。结论:培元解郁方对慢性应激造成的小鼠抑郁症状具有一定的改善作用,其机制可能与增加小鼠脑中单胺类神经递质5-HT含量,抑制IDO活性、下调IDOmRNA表达有关。4.培元解郁方对慢性不可预知性应激模型大鼠的影响目的:研究培元解郁方对慢性不可预知性应激模型大鼠的抗抑郁作用及机制。方法:每天随机给予大鼠刺激,建立慢性不可预知性应激模型;通过旷场实验以及糖水消耗实验进行模型的评价;采用免疫组织化学的方法检测大鼠海马中糖皮质激素受体(GR)、5-HT1A受体、N-甲基-D-天冬氨酸受体1(NMDAR1)的阳性表达数量;采用免疫荧光双标的方法检测大鼠海马中Ki67和GFAP以及Ki67和Neun的阳性表达的情况。结果:培元解郁方各剂量均可以增加慢性不可预知性大鼠旷场活动、蔗糖水摄入量,差异具有统计学意义。与模型组相比,培元解郁方高剂量组大鼠海马GR平均光密度值明显增加、阳性表达细胞数增加(P<0.01、P<0.05);培元解郁方各剂量组5-HT1A平均光密度值有下降趋势,但无统计学差异;培元解郁方中、低剂量组的NMDAR1平均光密度值明显降低。各组大鼠海马中Ki67和GFAP以及Ki67和Neun的阳性表达无显著差异。结论:培元解郁方对慢性应激大鼠有抗抑郁作用,与其增加大鼠海马中GR的表达、降低NMDAR的水平有关。5.培元解郁方对慢性应激联合脂多糖(LPS)抑郁模型小鼠的影响目的:研究培元解郁方对慢性应激联合脂多糖(LPS)抑郁模型小鼠的抗抑郁作用,并探讨其作用机制。方法:采用束缚加噪声刺激1Od后注射脂多糖1mg/kg的方法建立慢性应激联合脂多糖模型,观察培元解郁方对慢性应激联合脂多糖模型小鼠强迫游泳不动时间的影响,采用放射免疫法检测血清中IL-1β、TNF-α、IFN-γ的含量,脑中IFN-γ的含量,采用ELISA检测其脑中IFN-γ的含量,采用流式细胞仪检测游离钙离子浓度。结果:天丝饮、四逆散及培元解郁方均能够缩短慢性应激联合脂多糖模型小鼠强迫游泳不动时间(P<0.05);天丝饮、培元解郁方可以降低模型小鼠血清中的TNF-α和IFN-γ的含量,四逆散可以降低模型小鼠血清中的IL-1β和IFN-γ的含量;天丝饮、四逆散以及培元解郁方组小鼠脑中IFN-γ含量与模型组无统计学差异。天丝饮、四逆散以及培元解郁方组小鼠脑细胞Ca2+水平相对于模型组有下降的趋势,但在统计学上无显著区别。结论:天丝饮、四逆散、培元解郁方对慢性应激联合脂多糖模型均有一定的抗抑郁作用,天丝饮以及培元解郁方可以通过抑制前炎性细胞因子TNF-α、IFN-γ的水平来发挥抗抑郁作用,四逆散的抗抑郁作用机制与抑制IL-1β、TNF-α的水平有关。