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研究背景宫颈癌(cervicalcancer,CC)是全世界最常见的恶性肿瘤之一,发病率和死亡率均位于前列,是女性癌症死亡的第四大原因,严重威胁妇女生命和健康。2020年全球大约有604,000例新病例和342,000例死亡。2018年我国宫颈癌新发病例达106430例,死亡人数47739例,且发病趋向年轻化。宫颈癌的发生是一个漫长的过程,高危HPV病毒的持续感染是主要病因,病理发展过程由正常宫颈上皮细胞到低级别鳞状上皮内病变,再到高级别鳞状上皮内病变,然后异常细胞侵袭突破基底膜,发展成为宫颈癌。宫颈癌进展涉及复杂的生物学过程,与宫颈上皮细胞的异常增殖、迁移、侵袭密切相关。尽管有效的筛查大大提高了宫颈癌的早期诊断率,但其侵袭率和死亡率依然很高,给患者带来极大困扰,临床上没有明确的方法预测宫颈癌的复发和转移,因此在新领域探索宫颈癌发生、进展潜在的分子机制,寻找早期诊断的新标记物和治疗靶点,改善患者预后具有重要的临床价值。环状RNA(circularRNA,circRNA)是一类内源性非编码RNA,长度为数百到数千个核苷酸。它没有传统线性RNA的3及5末端,经特殊剪切形成共价闭环结构而得名。环状RNA可以作为竞争性内源性RNA与miRNA结合参与调控靶基因的表达,参与转录及转录后调控,也可通过结合RNA结合蛋白调控基因表达。研究表明,circRNA的异常表达在肿瘤的发生发展中发挥着重要作用,与肿瘤体积、临床分期及患者预后关系密切,由于其表达特异且相对稳定,有望成为早期诊断肿瘤的生物标志物或治疗潜在靶点,也是目前研究的热点之一。本研究运用生物信息学方法,对GEO数据库中的circRNA表达谱数据集进行数据挖掘,结合实验将差异表达的circRNA筛选出来并进行验证,从临床组织、宫颈癌细胞系、小鼠体内实验各个层面,对这一新分子hsa＿circ＿0065898进行探究。通过整合数据库信息,筛选并验证其所吸附的miRNA和miRNA靶向调控的mRNA,运用分子生物学方法来检测hsa＿circ＿0065898对宫颈癌细胞生物学行为的影响,进一步探究其作为miRNA的海绵分子促进宫颈癌细胞的增殖、迁徙和侵袭的调控模式,为阐明其促进肿瘤生长和转移的作用机制提供实验室依据。第一部分hsa＿circ＿0065898在宫颈癌组织中的差异表达及与临床特征的相关性目的1.筛选在宫颈癌组织和对照组织中差异表达的circRNA。2.验证数据集可靠性,并选择在宫颈癌组织中上调水平最显著的分子进行下一步深入研究。3.明确hsa＿circ＿0065898与宫颈癌患者临床指标的关系。方法1.对GEO数据库中的circRNA表达谱数据集GSE102686进行数据挖掘,描绘宫颈癌和癌旁组织环状RNA差异表达的火山图和热图。2.荧光实时定量PCR(qRT-PCR)法检测宫颈癌组10例和对照组10例标本中9个上调的circRNA分子的表达。3.扩大样本量(76对),qRT-PCR法再次检测hsa＿circ＿0065898表达,以验证其在宫颈癌组织中的差异表达情况,并分析hsa＿circ＿0065898与宫颈癌患者临床特征之间的关系。结果1.发现13个差异表达的circRNA分子,分别为4个下调的circRNA(hsa＿circ＿0000745、hsa＿circ＿0084927、hsa＿circ＿0002762和hsa＿circ＿0003037)以及9个上调的circRNA分子(hsa＿circ＿0065898、hsa＿circ＿0070190、hsa＿circ＿0000077、hsa＿circ＿0031027、hsa＿circ＿0043280、hsa＿circ＿0027821、hsa＿circ＿0000301、hsa＿circ＿0020926和hsa＿circ＿0046290)。2.荧光实时定量PCR(qRT-PCR)结果显示,hsa＿circ＿0065898等7个分子在宫颈癌组织中表达水平显著上调,与数据集中的分析结果一致,但hsa＿circ＿0020926和hsa＿circ＿0046290在宫颈癌和正常宫颈组织中的表达水平无显著性差别,与前述分析结果不相符。hsa＿circ＿0065898在宫颈癌组织中上调水平最为显著(P