葡萄糖调节蛋白78(GRP78)在多种肿瘤细胞中特异性高表达,高表达的GRP78在肿瘤细胞中具有定位多样性,且具有多样化的促癌效应。值得注意的是,GRP78不但可以定位于胞内,还可通过外泌体途径被肿瘤细胞分泌到肿瘤微环境中,从而发挥促肿瘤作用。因此寻找能够阻断GRP78分泌的小分子抑制剂,将提高化疗药物的抗癌效率,为癌症治疗打开新的突破口。为了发现GRP78分泌的潜在抑制剂,我们将从以下几个方面进行研究:1.通过检测多种结肠癌细胞系及正常肠上皮细胞的培养基中GRP78的含量,发现结肠癌细胞能特异性分泌GRP78,且结肠癌细胞系中DLD1分泌的GRP78含量较高,而HCT-116分泌的GRP78相对较少。而将GRP78的K633位点突变为谷氨酰胺后,肠癌细胞的GRP78分泌量明显降低,表明K633位点对GRP78的分泌具有重要作用。此外,通过细胞共培养模型发现,GRP78的分泌能促进HUVEC细胞的血管生成能力。表明分泌型GRP78在微环境中能发挥促肿瘤相关血管生成的作用。2.运用虚拟筛选及分子对接等技术在虚拟平台创建多种小分子的药物结构与GRP78蛋白结构间三维水平的相互作用模型,从而在51种中药分子中发现了5种与GRP78相互作用力较强且结合方式多样化的小分子。这5种中药小分子分别是:丹酚酸A(Salvianolic acid A,SAA)、柚皮苷(Naringin)、桔梗皂苷D(Platycodin D)、地奥司明(Diosmin)和异牡荆素(Isovitexin)。3.通过使用蛋白免疫印迹在细胞水平的验证,发现丹酚酸A能够有效抑制GRP78的分泌。此外,小分子与蛋白相互作用的研究揭示SAA可与GRP78的633位的赖氨酸残基(K633)发生相互作用,且具有极强的亲和力,从而发挥其抑制GRP78分泌的效应。研究还发现丹酚酸A能够通过阻断GRP78的分泌干预肿瘤相关血管生成。4.研究发现SAA-GRP78复合物的形成,能够促进细胞溶质中GRP78分选进入溶酶体降解途径而不是被外泌体分泌。体内实验结果显示,丹酚酸A能降低瘤体内VEGF表达量,抑制瘤块生长,即丹酚酸A通过改善肿瘤微环境发挥抑癌作用。