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目的研究小鼠miR-223相关的环状RNA分子circ-012559(mmu-circ-012559)对髓源性抑制细胞(myeloid-derived suppressor cells,MDSCs)免疫抑制功能的影响,并分析其可能的作用机制。方法(1)构建小鼠Lewis肺癌移植瘤模型,免疫磁珠法分离荷瘤小鼠脾脏及肿瘤组织来源的MDSCs,流式细胞术(flow cytometry,FCM)鉴定MDSCs分选纯度。通过实时荧光定量PCR(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测MDSCs中mmu-circ-012559及miR-223的相对表达水平。(2)免疫磁珠法分离荷瘤小鼠脾脏MDSCs,给予Lewis肺癌细胞培养上清(tumor culture conditioned medium,TCCM)处理24h。qRT-PCR检测TCCM处理24h后MDSCs中mmu-circ-012559及miR-223的相对表达水平。将处理过的MDSCs与正常小鼠脾脏来源的CD4+T细胞进行共培养,通过3H-胸腺嘧啶核苷([3H]-thymidine,3H-TdR)掺入法检测培养体系中每分钟脉冲数(counts per minute,CPM),反映CD4+T细胞增殖能力。Western-Blot检测MDSCs中总STAT3蛋白表达及STAT3蛋白磷酸化水平变化。(3)将si-NC+miR-inhibitor NC、si-mmu-circ-012559+miR-inhibitor NC以及si-mmu-circ-012559+miR-223 inhibitor转染至TCCM处理的MDSCs中。培养24h后,将MDSCs与正常小鼠脾脏来源的CD4+T细胞进行共培养,3H-TdR掺入法检测CD4+T细胞增殖能力。FCM检测MDSCs免疫抑制相关效应分子活性氧(reactive oxygen species,ROS)的表达,试剂盒检测MDSCs精氨酸酶1(arginase 1,Arg1)活性。Western-Blot检测MDSCs中总STAT3蛋白表达及STAT3蛋白磷酸化水平变化。结果(1)荷瘤小鼠肿瘤组织来源MDSCs中mmu-circ-012559的表达量显著高于脾脏MDSCs(3.59±0.04 vs 0.80±0.08,p<0.01),而miR-223的表达量显著低于脾脏MDSCs(0.21±0.05 vs 2.57±0.29,p<0.01)。(2)TCCM处理组MDSCs中mmu-circ-012559的表达水平显著高于对照组(1.95±0.08 vs 1.01±0.13,p<0.01),而miR-223显著低于对照组(0.50±0.12vs 2.13±0.75,p<0.05)。MDSCs经TCCM处理后,其CPM值明显低于对照组(p<0.01)。此外,MDSCs中STAT3及磷酸化STAT3蛋白表达量显著高于对照组(p<0.05)。(3)转染si-mmu-circ-012559至TCCM处理后的MDSCs,再加入CD4+T细胞增殖体系,其CPM值高于转染对照组(p<0.05)。而相比si-mmu-circ-012559+miR-inhibitor NC组,si-mmu-circ-012559与miR-223 inhibitor共转染组CPM值降低(p<0.05)。另外,MDSCs给予si-mmu-circ-012559+miR-inhibitor NC处理后,ROS表达量下降(p<0.05),Arg1活性也降低(8.96±1.44 vs 12.75±0.36,p<0.05),相应的,STAT3及磷酸化STAT3蛋白表达量也减少。而si-mmu-circ-012559与miR-223 inhibitor共转染组ROS表达量(p<0.05)及Arg1活性(13.43±1.03 vs 8.96±1.44,p<0.05)回升,STAT3及磷酸化STAT3蛋白表达量也有所恢复。以上结果显示敲减mmu-circ-012559后,MDSCs免疫抑制能力明显减弱,而miR-223 inhibitor与si-mmu-circ-012559共转染后,MDSCs免疫抑制能力可得到恢复。结论肿瘤微环境MDSCs中的mmu-circ-012559表达显著增多,而miR-223的表达水平显著下降。体外敲减mmu-circ-012559能够下调MDSCs免疫抑制相关效应分子的表达,减弱MDSCs的免疫抑制功能,而共敲减miR-223后,MDSCs免疫抑制能力恢复。提示mmu-circ-012559可能通过靶向miR-223,上调STAT3活化,进而调控MDSCs的免疫抑制功能。