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内罗病毒属( Nairovirus)是一类以蜱虫作为传播媒介的布尼亚病毒(Bunyaviridae),可以在人和动物中引发多种烈性感染性疾病。ERVE病毒(ERVEV)是在法国西北部的 Erve河谷中首次被分离发现的一类病毒,属于欧洲内罗病毒属的一名成员。近年的研究怀疑ERVE病毒(ERVEV)与人类长时间的剧烈头痛(霹雳性头痛)、急性脑炎和弥散性神经元坏死等疾病密切相关,但对于该病毒的传播途径和复制机制方面的研究较少。内罗病毒基因 S片段编码病毒核衣壳蛋白(NP),NP可进一步包裹病毒基因组和RNA依赖的RNA聚合酶(RdRp)形成核糖核蛋白复合体(RNP),对病毒的成熟和包装都至关重要。 本研究主要以ERVE病毒核蛋白为研究对象,将其核蛋白基因成功构建到pGEX-6p-1表达载体中,应用体外经大肠杆菌原核表达系统尝试对ERVE病毒核蛋白全长序列及不同截短体蛋白的表达,并应用亲和层析和凝胶过滤层析的纯化方法,最终获得ERVEV NP的N端482位氨基酸截短体蛋白进行蛋白结晶、结构解析和功能分析。ERVEV NP482的晶体结构与克里米亚-刚果出血热病毒核蛋白(CCHFV NP)的晶体结构具有一定相似性,但二者在头杆结构取向和头部结构域功能口袋等结构细节方面具有差异性。ERVEV NP482蛋白在溶液条件下不稳定,室温存放会发生杆部结构域的降解,只保留头部结构域(ERVEV NPhead)并可形成头部结构域晶体。ERVEV NP482蛋白体外实验并不表现该核酸内切酶活性,而降解后的ERVEV NPhead却重新获得对双链DNA的核酸内切酶活性,推测该内切酶活性的发挥与底物是否可以成功进入头部的功能“口袋”有关。ERVEV NP482可被caspase-3蛋白酶水解为两部分,这一特性可能在病毒感染宿主细胞启动免疫凋亡机制中发挥重要作用。通过本研究对ERVE病毒核蛋白的结构和功能的分析能够更好的揭示病毒的转录复制过程,深入了解其侵染机制,为疫苗和抗病毒药物的开发提供理论基础。图34个,表15个,参考文献50篇。