目的：　　青光眼作为全球不可逆性致盲的首要原因，是一组以视神经结构性损伤及视网膜神经节细胞进行性凋亡为特征的退行性视网膜疾病。近年来有研究显示细胞因子在青光眼发病过程中具有不可忽视的作用。在青光眼患者房水和外周血中检测发现CXCL8等细胞因子的异常表达，同时细胞体外培养实验曾报道CXCL8对神经元细胞表现为毒性作用，提示CXCL8可能参与了视网膜神经节细胞的凋亡及视神经损伤过程。白细胞介素8又称CXCL8，属CXC趋化因子亚家族，通过结合其受体CXCR1/2，广泛参与炎症，血管生成，肿瘤细胞增殖及迁移的调节。CXCR1/2拮抗剂G31P 可与CXCR1/2高亲和力结合，阻断CXCL8发挥作用，在抗炎抗肿瘤等研究中应用广泛。本次实验目的为探究CXCL8对视网膜神经节细胞凋亡的损伤及其受体拮抗剂G31P 能否减缓其影响。　　方法：　　1. 细胞的培养：体外培养小鼠RGC-5细胞，常规培养于含10%FBS、100 U·m L-1青、链霉素的DMEM-F12培养基中。静置于37℃、5%CO2的细胞培养箱中，24h后换液。　　2. 细胞分组：将处于对数生长期的RGC-5分成以下三组：(a) 正常对照组(Control组)，细胞常规培养于DMEM-F12基础培养基；(b) CXCL8组，常规培养+20ng/ml CXCL8；(c) CXCL8+G31P组，常规培养细胞在CXCL8刺激前30 min 加入100 ng/ml的G31P进行预先孵育。　　3. 实验检测：　　3.1 细胞活性试验：采用CCK-8试剂进行检测。细胞分为正常对照组，CXCL8 （0，5，10，20，25，50，100ng/ml ）处理组，24h后于酶标仪下测定吸光度值（OD值）。　　3.2 细胞凋亡：倒置显微镜下直接观察和Hoechst33258荧光染色法比较细胞形态变化，实验分组同2，处理24h 后，细胞固定，加入Hoechst3325试剂孵育，倒置荧光显微镜下观察；流式细胞术定量分析细胞凋亡率，分组同2，收集细胞后分别加入Annexin V-FITC和PI染液孵育，流式细胞仪上机检测。　　3.3 CXCR1和CXCR2表达检测：RT-PCR检测正常情况和CXCL8处理24h后细胞内CXCR1/2 mRNA含量。　　3.4 凋亡基因表达情况：采用RT-PCR和Western blotting实验分别观测凋亡相关基因如Bax、Bcl-2和Caspase-3在核酸水平及蛋白水平的表达情况，实验分组同2，培养24h后，提取细胞总RNA和蛋白进行后续实验。　　结果：　　1. CCK-8实验结果显示CXCL8可显著抑制RGC-5细胞活性，且呈浓度依赖性，不同浓度CXCL8 处理组细胞活性分别为0.72%±0.03%，0.62%±0.07%，0.51%±0.05%，0.38%±0.03%，0.36%±0.03%，0.33%±0.05%。　　2. 普通倒置显微镜下可见，随着刺激浓度增加，细胞形态开始发生改变，部分细胞变圆，胞体缩短，少量细胞脱落，而正常对照组细胞形态正常，贴附情况良好。经Hoechst33258染色后，与对照组相比，在CXCL8处理后，象征着细胞凋亡的形态学变化如致密浓染、片段化的细胞核增多，G31P预孵组可改善CXCL8所致的凋亡现象。流式细胞实验结果显示，正常对照组、CXCL8组、CXCL8+G31P处理组凋亡率分别为2.8%±0.20%、5.62%±0.50%、2.89%±0.45%，CXCL8处理24h 可使细胞凋亡率提高约2倍，而G31P预孵组细胞凋亡情况与正常对照组基本相近。正常对照组、CXCL8组、CXCL8+G31P组各组组间差异具有统计学意义（P＜0.01）。　　3. RT-PCR 结果显示，CXCR1/2在RGC-5细胞内表达，且CXCL8处理后二者水平呈不同程度升高，（CXCR1：1.2±0.1vs 0.54±0.03，P＜0.01；CXCR2：0.64±0.12 vs 0.22±0.03，P＜0.05）。　　4. RT-PCR和Western bloting结果显示CXCL8可促进Bax和caspase-3基因在核酸及蛋白质水平上的表达，同时对Bcl-2的表达起抑制作用。但对细胞进行 G31P预处理可减轻以上CXCL8的毒性作用，差异具有统计学意义。　　结论：　　1 CXCL8可引起体外培养的RGC-5细胞损伤，抑制细胞活性，诱导细胞凋亡。其特异性拮抗剂G31P可对受到CXCL8诱导损伤的RGC-5细胞起保护作用。　　2 CXCL8对RGC-5细胞的损伤作用可能与上调凋亡相关经典基因Bax和caspase-3，降低抗凋亡基因Bcl-2的表达相关。