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第一部分:白头翁皂苷提取物(Hederacochiside C,HSC)抗日本血吸虫活性的研究 目的:观察HSC对小鼠体内不同发育阶段日本血吸虫的杀虫效果。 方法:将感染日本血吸虫尾蚴的ICR小鼠,分别于感染后14天、35天尾静脉注射不同剂量的HSC,每天2次,连续5天。感染49天后摘除眼球采集血液,剖杀小鼠,收集虫体计数,计算减虫率和减雌率;取肝脏用4%氢氧化钾消化,计算减卵率。 结果:于感染后14天给药组,HSC高剂量(400mg/kg)、中剂量(200mg/kg)和低剂量(100mg/kg)组鼠的减虫率分别为44.1%、32.4%和28.9%,吡喹酮(praziquantel,PZQ)和青蒿琥酯(artesunate,ART)治疗组鼠的减虫率分别为48.1%和83.9%;感染后35天给药组中,HSC高剂量(400mg/kg)、中剂量(200mg/kg)和低剂量(100mg/kg)组鼠的减虫率分别为48.1%、43.2%和27.9%,PZQ和ART治疗组鼠的减虫率分别为80.0%和91.7%。HSC实验组减虫率与对照组相比具有显著性差异。 结论:在同一发育期内,不同剂量的HSC作用于小鼠体内日本血吸虫,高剂量(400mg/kg)组的杀虫效果最佳;在相同剂量条件下,HSC对35天龄成虫杀灭效果优于14天龄童虫杀灭效果。在所有不同剂量的治疗组中,减雌率比减虫率高,与感染后未治疗组相比,雌虫的数量明显减少。 第二部分:HSC抗曼氏血吸虫活性的研究 目的:观察HSC对小鼠体内不同发育阶段曼氏血吸虫的杀虫效果。 方法:将感染曼氏血吸虫尾蚴的小鼠,分别于感染后14天、42天尾静脉注射HSC,每天2次,连续5天。感染56天后摘除眼球采集血液,剖杀小鼠,收集虫体计数,计算减虫率和减雌率;取肝脏用4%氢氧化钾消化,计算减卵率。 结果:于感染后14天给药组,HSC400mg/kg组鼠的减虫率为39.9%,PZQ和ART治疗组鼠的减虫率分别为58.5%和78.9%;感染后42天给药组中,HSC400mg/kg组鼠的减虫率为61.0%,PZQ和ART治疗组鼠的减虫率分别为94.9%和76.5%。HSC各实验组的减虫率与对照组相比具有显著性差异。 结论:单一剂量(400mg/kg)HSC对小鼠体内不同发育阶段的曼氏血吸虫有不同程度的杀虫效果:42天龄成虫杀灭效果优于14天龄童虫杀灭效果;在所有的单一剂量(400mg/kg)的治疗组中,减雌率比减虫率高,与感染后未治疗组相比,雌虫的数量明显减少;HSC可明显降低42天虫龄期小鼠体内的总虫荷数量及雌虫数量。 第三部分:HSC对感染日本血吸虫小鼠免疫调控的作用及其杀虫机制的初步研究 目的:将肝组织切片,在光学显微镜下观察HSC对感染日本血吸虫小鼠肝脏组织病理学的影响,检测细胞免疫相关因子的动态变化,进而探究HSC对小鼠日本血吸虫病引发的炎症反应的影响。通过扫描电子显微镜进行扫描观察血吸虫表皮的形态变化,来初步探讨HSC对日本血吸虫的作用机制。 方法:感染日本血吸虫尾蚴的ICR小鼠于给药后7周摘除小鼠眼球,采集血液,剖杀小鼠,将肝脏组织切片,在光镜下观察HSC对肝脏肉芽肿的影响。应用夹心法ELISA测定血清中IgG、TNF-α、IL-4和IL-17a。 将感染30条尾蚴的ICR小鼠在42天后,用0.3%的枸橼酸钠溶液灌注冲虫,获得无菌的日本血吸虫成虫。在不同浓度的HSC(3.75、7.5、15、30、60μg/ml)培养基中培养72小时,观察HSC对体外日本血吸虫成虫的杀伤作用。将标本用扫描电子显微镜扫描,观察HSC对虫体表皮的影响。 结果:感染日本血吸虫后未治疗组小鼠肝脏的组织结构明显改变,呈现出以炎性浸润和大量肉芽肿出现为特点的形态特征;与未治疗组相比,经HSC治疗后的小鼠肝脏内炎症肉芽肿的大小明显降低。用200mg/kg HSC对感染14~18天和35~39天的小鼠进行治疗发现,肝脏中炎性细胞的数量明显减少,肝小叶的结构恢复并接近正常组织,大部分肝细胞呈现正常的表观。 用ELISA的方法对HSC治疗的小鼠免疫反应进行测定,结果显示:与感染后未治疗组相比,200mg/kg HSC能有效下调IgG、TNF-α、IL-4和IL-17a的表达,表现出最好的免疫调节作用。此外,扫描电子显微镜的检查结果显示治疗组雄性虫体表皮呈现异常结构,间结节皮层区呈现广泛的水肿、糜烂和脱皮。 结论:200mg/kg HSC的治疗剂量能显著降低肉芽肿的炎性反应,减轻血吸虫虫卵造成的肝损伤。通过扫描电子显微镜观察,60μg/ml HSC治疗组雄性虫体表面损伤最为严重,受损的皮层脱落,并暴露出皮下组织。这些结果表明,HSC具有抗血吸虫活性的作用。