目的：构建穿膜肽-增强型绿色荧光蛋白(TAT-EGFP)融合蛋白的原核表达系统，诱导TAT-EGFP蛋白的表达，研究该融合蛋白在体外对人膀胱癌细胞(EJ细胞)和膀胱癌组织的跨膜作用，对TAT-EGFP促进三氧化二砷(As2O3)进入EJ细胞膜发挥抗肿瘤的作用进行观察，为后续构建TAT-肿瘤特异性抗体-As2O3新型偶联药物传送体统奠定基础。 方法：以PEGP-1为模板，设计包含TAT序列的引物，用PCR技术扩增TAT-EGFP基因，扩增产物连入pET30a载体，构建成重组质粒pET30a-TAT-EGFP。将重组质粒转入大肠杆菌BL21(DE3)中，用IPTG诱导表达TAT-EGFP融合蛋白。经超声法裂菌处理，所得含TAT-EGFP蛋白菌液用pET30a表达系统相应的Ni-NTA His Resin纯化系统进行纯化，得到纯化的TAT-EGFP融合蛋白。该蛋白经纯化后分别与膀胱瘤细胞(EJ)和膀胱癌组织共孵育，用荧光显微镜观察TAT-EGFP融合蛋白进入EJ细胞和膀胱癌组织的情况。将纯化蛋白、三氧化二砷(As2O3)与EJ细胞共孵育，用原子荧光光度计检测EJ细胞中砷浓度，MTT法检测EJ细胞的生长抑制率，对TAT-EGFP融合蛋白促进As2O3杀伤EJ细胞的功能进行观察。 结果：测序证实扩增的TAT-EGFP基因与预期序列一致，重组质粒pET30a-TAT-EGFP构建成功。TAT-EGFP融合蛋白原核表达系统所表达的TAT-EGFP纯度达90％左右，浓度为1.24mg/ml。TAT-EGFP融合蛋白能穿入EJ细胞和膀胱癌组织，穿细胞效率与浓度和时间相关；TAT-EGFP可促进As2O3对EJ细胞的杀伤作用，增加细胞抑制率。 结论：成功构建了重组表达质粒pET30a-TAT-EGFP，纯化的融合蛋白具有穿过膀胱癌细胞和膀胱癌组织的作用，TAT-EGFP融合蛋白可提高As2O3进入人膀胱癌(EJ)细胞的浓度并显著促进As2O3对EJ细胞活性的抑制作用。