DON作用下仔猪胃肠道5-HT的动态变化-SABC免疫组织化学法研究

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脱氧雪腐镰刀菌烯醇(Deoxynivalenol,DON),又名呕吐毒素(Vomitoxin,VT),是目前全球谷物污染最严重的真菌毒素之一。在所有的易感动物中,以猪最为敏感。5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT),又名血清素(Serotonin)。人体内90%的5-HT存在于消化道粘膜。在痛觉调制、感觉运动、心血管功能以及呼吸、睡眠、食欲等多方面发挥重要作用。本研究采用DON标准品,通过静注染毒途径,研究该毒素对仔猪胃肠道5-HT的动态影响,探讨DON作用下,胃肠道病理变化,5-HT的动态变化,以揭示胃肠道5-HT的与DON的致呕吐途径、腹泻以及胃肠组织损伤的关系,进而为防控猪的DON中毒提供理论依据。   试验选用18头健康猪,随机分成6组,其中1组对照组和5组为实验组。对照组注射相同体积的生理盐水,注射完后立即心脏放血宰杀:实验组耳缘静脉注射DON,染毒剂量为75μg.kg-1.b.w.,注射完毕时开始计时并观察临床症状,按10、20、30、40、50min后心脏放血致死。所有组均在宰杀后迅速取以下组织:胃、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠、直肠。组织样4%多聚甲醛固定,冲水,脱水,包埋等一系列步骤后,制成5μm厚的石蜡切片,免疫组织化学染色及HE染色结合光学显微镜观察等方法进行研究。其中,免疫组织化学染色后,5-HT阳性反应结果采用200倍镜下,每切片随机10个视野的方式,对仔猪胃肠道的阳性细胞进行灰度值及数目研究。   结果显示:DON静注组后,60%仔猪在5-10min内出现磨牙、白沫的呕吐前症状,75%呕吐较为集中的时间范围是给药后15-20min,即在出现磨牙症状10min左右出现呕吐。免疫组织化学染色结果显示,5-HT免疫反应阳性细胞分布于肠黏膜的绒毛上皮细胞和肠腺上皮细胞之间,且位于绒毛上皮之间的阳性细胞分布于绒毛的中段和底端,绒毛顶端较少见分布。5-HT免疫反应阳性细胞轮廓清晰,多呈锥体形,此外还有梭形、椭圆形或不规则形,免疫反应阳性产物呈棕黄色颗粒状,分布于细胞质中,细胞核呈阴性,部分细胞核被棕黄色反应产物所掩盖。免疫阳性细胞及其灰度值分析结果显示:DON能引起对胃肠道5-HT的变化。即0-30min时间段主要分泌5-HT,30-50min阶段转为储备阶段,该现象与呕吐的现象相符。5-HT在DON引起的呕吐过程中,起着重要的作用。DON是先通过作用于极后区呕吐中枢和化学感觉器激发区(CTZ),再通过传出神经引起胃肠道5-HT的变化,还是DON通过引起胃肠道5-HT的释放,再通过一系列传导途径作用于CTZ引起呕吐,有待进一步研究。DON引起腹泻方面,可能是DON在食糜中的吸收是一个缓慢的过程,由于DON的缓慢作用,它引起的5-HT的持续释放可能是导致腹泻的重要原因之一,确认尚需要进一步的研究。一次性给药并未能达到胃肠道有病理化的程度。具体需要多长时间的作用才能造成胃肠道的损伤有待进一步研究。
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