2001年,Ohura等在日本新生儿代谢筛查异常的肝内胆汁淤积症患儿中发现存在SLC25A13基因突变,并将其命名为Citrin缺乏引起的新生儿肝内胆汁淤积症(Neonatal Intrahepatic Cholestasis caused by Citrin Deficiency,NICCD)。NICCD临床表现多样,大多数患儿有特征性氨基酸,如瓜氨酸、蛋氨酸等水平升高。早期研究认为NICCD是一种自限性疾病,但后续的研究发现,有些患儿往往在新生儿期即因为严重的低蛋白血症、凝血功能异常等而夭折。而有些曾出现过NICCD症状的患儿在症状消失后的数年或数十年之后又出现严重的成年起病Ⅱ型瓜氨酸血症(Adult-onset typeⅡcitrullinemia,CTLN2)表现,导致肝功能严重受损,最终需要进行肝移植治疗,还有的甚至发生猝死。因此,NICCD患儿的早期诊断对于指导治疗和预后非常重要。近年来,随着SLC25A13基因研究的深入,发现在东亚三国日本、中国及韩国人群中,SLC25A13突变基因的携带率都不低,而且新的突变也不断被检测出。不同人群中SLC25A13基因的突变形式和频率有很大差别。SLC25A13基因突变在国内婴儿肝内胆汁郁积症中少见报道,有资料显示中国健康人群中SLC25A13基因突变携带率为1/65,推测中国人群中SLC25A13基因突变应不少见。由于基因突变类型及检出率存在着种族、地域差异,有必要探讨中国人群SLC25A13基因突变特点。为此,我们对婴儿肝内胆汁淤积症患儿进行SLC25A13基因突变研究,以探讨其突变谱特征和检出率,为将来开展分子诊断提供理论基础。第一部分伴血氨基酸异常婴儿肝内胆汁淤积症患儿中SLC25A13基因突变谱目的:探讨伴血氨基酸异常婴儿肝内胆汁淤积症患儿中是否存在SLC25A13基因突变及其突变谱特征。方法:2003年12月至2006年12月三年间就诊于复旦大学附属儿科医院婴儿肝内胆汁淤积症患儿115例进行血氨基酸质谱分析。对其中伴血瓜氨酸、蛋氨酸至少一项两倍以上升高者10例及2007年1月至6月有类似血氨基酸谱异常的婴儿肝内胆汁淤积症患儿4例,共14例入选基因研究。全部入选对象先行SLC25A13基因已报道的12种常见突变位点([Ⅰ]851del4,[Ⅱ]IVS11+1G＞A,[Ⅲ]1638ins23,[Ⅳ]S225X,[Ⅴ]IVS13+1G＞A,[Ⅵ]1800ins1,[Ⅶ]R605X,[Ⅷ]E601X,[Ⅸ]E601K,[Ⅹ]IVS6+5G＞A,[Ⅺ]R184X及[ⅩⅣ]IVS6+1G＞C)检测。对仅检出单个位点突变的研究对象,继续进行所有外显子区及其邻近序列分析。结果:检出SLC25A13基因突变患儿8例,包括复合杂合突变[Ⅰ]/[Ⅲ]2例,纯合突变[Ⅰ]/[Ⅰ]、复合杂合突变[Ⅰ]/[Ⅺ]及纯合突变IVS6+1G＞A/IVS6+1G＞A各1例,杂合突变[Ⅰ]/-3例,其中纯合突变IVS6+1G＞A/IVS6+1G＞A是国际上尚未见报道的一种新型突变。小结:1.血氨基酸异常婴儿肝内胆汁淤积症患儿中存在SLC25A13基因突变。2.SLC25A13基因突变谱和国外报道存在明显区别:突变[Ⅰ]、[Ⅲ]是中国婴儿肝内胆汁淤积症患儿的常见突变形式,以突变[Ⅰ]最多见;未发现国外报道常见突变[Ⅱ];新发现1例纯合突变IVS6+1G＞A/IVS6+1G＞A。第二部分婴儿肝内胆汁淤积症患儿中SLC25A13基因突变检出率目的:探讨SLC25A13基因突变在中国婴儿肝内胆汁淤积症患儿中的检出率。方法:2003年12月至2006年12月就诊于复旦大学附属儿科医院的115例婴儿肝内胆汁淤积症患儿。对不伴血瓜氨酸和/或蛋氨酸两倍以上升高者105例先行SLC25A13基因常见突变[Ⅰ]及[Ⅲ]筛查,突变[Ⅰ]采用实时荧光定量PCR双标记探针法检测,突变[Ⅲ]采用PCR产物直接电泳法检测。对仅检出单个位点突变的筛查对象,继续进行其余已报道的10种常见突变位点检测。检测结果仍为单个杂合突变的对象进行SLC25A13基因所有外显子区及其邻近序列分析。结果:105例不伴血氨基酸异常患儿共检出SLC25A13基因突变5例,其中纯合突变[Ⅰ]/[Ⅰ]1例,杂合突变[Ⅰ]/-4例。和第一部分115例中10例伴血氨基酸异常患儿突变检测结果合并进行检出率分析。115例婴儿肝内胆汁淤积症患儿共检出SLC25A13基因突变病例10例,占8.7%,其中纯合或复合杂合突变4例,杂合突变6例。小结:SLC25A13基因突变可能是我国婴儿肝内胆汁淤积症的重要原因之一,除可存在于伴血瓜氨酸、蛋氨酸异常婴儿肝内胆汁淤积症患儿中外,也存在于不伴血氨基酸异常的婴儿肝内胆汁淤积症患儿中。结论:1.SLC25A13基因突变可能是我国婴儿肝内胆汁淤积症的重要原因之一,部分可不伴血氨基酸异常。2.突变谱和国外报道存在明显区别:突变[Ⅰ]、[Ⅲ]是我国SLC25A13基因的常见突变形式,尤其以[Ⅰ]多见;我国存在国外未曾见报道过的新突变。