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正畸治疗过程中,常常发生患者口腔卫生情况不佳导致的牙槽骨吸收,牙槽骨作为牙周组织,借助牙周膜纤维与牙齿紧密相连,在维持牙齿的稳定和行使正常生理功能上发挥着重要作用。在临床上发现,由于牙周疾病或者正畸力量过大,往往导致牙槽骨吸收。人牙周韧带中存在有牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells,PDLSCs),其具有自我增殖和多向分化潜能,可作为组织工程最直接可靠的种子细胞。研究表明,h PDLSCs在不同的培养环境和细胞因子的作用下,可不断增殖分化成为成骨细胞、成牙骨质细胞和成纤维细胞;其可修复牙周缺损,使牙周组织再生。Micro RNA在间充质干细胞向成骨细胞分化过程中起着重要作用。h PDLSCs属于间充质干细胞,具有多向分化潜能,然而在h PDLSCs向成骨细胞方向分化过程中,hsa-mi R-146a是否起到了重要的调控作用尚未得知。目的为了研究在特定体外微环境中人牙周膜干细胞向成骨细胞方向分化过程中mi R46a-5p是否发挥调控作用,从而为牙槽骨的再生及发育机制提供基础性研究。实验方法本实验首先构建慢病毒特异性上/下调mi R146a-5p,进而通过由根端牙胚细胞(Apical Tooth germ cells,APTGC)构成的体外微环境诱导h PDLSCs向成骨细胞方向分化,对诱导前后的h PDLSCs进行碱性磷酸酶(Alkaline Phosphatase,ALP)活性检测以及成骨相关基因:(ALP、BSP及OCN)检测。1.h PDLSCs的体外培养和筛选;2.APTG诱导培养基的制备;3.RT-QPCR验证mi R146a-5p表达差异;4.慢病毒转染h PDLSCs;5.ALP活性检测;6.Real-time PCR检测特异性上/下调mi R146a-5p后成骨相关基因:(ALP、BSP及OCN)的变化。实验结果1.通过免疫磁珠法筛选获得h PDLSCs。2.RT-QPCR检测验证mi R146a-5p在h PDLSCs向成骨细胞方向分化过程中表达增高。3.慢病毒特异性转染效率检测显示LV-has-mi R146a-5p及LV-has-mi R146a-5pinhibitor导入人牙周膜干细胞后其mi R146a-5p特异性表达为上调及下调。4.ALP活性检测显示,LV-has-mi R146a-5p上调组细胞ALP活性较对照组有显著升高,LV-has-mi R146a-5pinhibitor组细胞ALP活性较对照组有显著降低。5.RT-PCR检测显示LV-has-mi R146a-5p上调组细胞成骨细胞相关基因(ALP、BSP及OCN)的转录水平表达量增加,LV-has-mi R146a-5pinhibitor组细胞成骨细胞相关基因(ALP、BSP及OCN)的转录水平表达量降低。结论mi R-146a-5p促进人牙周膜干细胞向成骨细胞分化。