昆虫病原线虫是当今热门的绿色生物农药，具有高效、安全、杀虫活性高等优点，其中起杀虫作用的是昆虫病原线虫共生菌。病原线虫共生菌寄生于昆虫病原线虫肠道内，为革兰氏阴性菌、肠杆菌科，共有3个属:致病杆菌属(Xenorhabdus)、发光杆菌属（Photorhabdus）和沙雷氏菌属（Serratia），分别与斯氏科（Steinernematidae）、异小杆科（Heterorhabditidae）和小杆科拟异小杆属（Heterorhabditidoides）线虫共生。本实验室从昆虫病原线虫新种如皋拟异小杆线虫——Heterorhabditidoides rugaoensis分离出具有强效杀虫活性的共生菌菌株Serratia nematodiphila R187，该菌株主要杀虫活性成分为其分泌的胞外杀虫毒素蛋白。本文分离纯化了该菌株的杀虫毒素，并对其进行基因克隆和功能鉴定研究。所用关键方法及取得的主要结果如下:　　1.R187粗发酵液对大蜡螟老熟幼虫的半数致死量(LD50)为6.44(4.74-8.02)ng·mg-1。将发酵液粗提物冻干脱盐后利用DEAE Sepharose FF离子交换层析、G75分子筛和FPLC Resouce Q柱结合杀虫活性检测从中分离纯化到一个相对分子质量约为55KDa的杀虫蛋白SI476。纯化后的蛋白对大蜡螟老熟幼虫的血腔毒力LD50为3.57(2.13-6.16)ng·mg-1。　　2.利用特异引物对菌株R187的毒素蛋白基因进行PCR扩增，该基因大小为1450bp。构建表达载体pET-R187进行目的蛋白重组表达。最佳诱导条件为37℃、0.1mmol·L-1 IPTG，3小时诱导，但并没有得到可溶性目的蛋白。表达蛋白完全以包涵体形式存在，对包涵体进行复性，经过亲和层析和甲酸切割后的蛋白虽然大小与预测相同，但并不具有杀虫活性。　　3.克隆菌株R187杀虫蛋白的部分基因片段si476s，并对其进行了插入失活。通过PCR扩增，得到SI476中450bp部分编码序列片段，构建重组质粒pUTKM-si476s，转化进Ecoli.S17-1(λpir)，并与受体嗜线虫沙雷氏菌R187进行杂交，成功筛选到si476s突变菌株。突变株很少或者无法产生金属蛋白酶，金属蛋白酶的产量明显减少。野生型R187菌对大蜡螟血淋巴半致死量(LD50)为68.090(55.742-75.522)CFU。经过插入失活后，测得LD50为218.716(174.011-256.899)CFU。结果表明突变株对大蜡螟幼虫的杀虫活性明显变弱。