猪带绦虫热休克蛋白90α基因的克隆表达及免疫学功能的初步研究

来源 :贵阳医学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:whm9903
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:生物信息学分析和预测猪带绦虫热休克蛋白90α(Taenia solnium Heat shock protein90 alpha)基因及其编码蛋白的结构和特性,原核克隆表达猪带绦虫热休克蛋白90α基因(Ts HSP90α),对重组Ts HSP90α其免疫学功能进行初步研究。  方法:利用美国国家生物技术信息中心(NCBI,http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)和瑞士生物信息学研究所的蛋白分析专家系统(ExPASY,http://ca.expasy.org/)中有关基因和蛋白的序列和结构信息分析的各种工具,结合其它生物信息学分析软件包,如 Vector NTI suite,从猪带绦虫全长cDNA质粒文库中识别Ts HSP90α基因及其编码区,分析、预测该基因编码蛋白质的理化特性、翻译后的修饰位点、功能域、亚细胞定位、拓扑结构、二级结构、三维空间构象等。将猪带绦虫成虫HSP90α克隆到原核表达质粒pET-28a(+)中,在大肠埃希菌BL21/DE3中用 IPTG诱导表达,表达产物通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定,用镍离子金属螯合剂亲和层析柱进行纯化,纯化的重组蛋白用蛋白印迹(Western Blotting)进行免疫学分析。  结果:该基因全长1079bp,编码区为176bp-1054bp,编码292个氨基酸,为全长基因;BLASTX发现该基因是热休克蛋白90α的同源基因; PCR、双酶切及DNA测序结果均表明pET-28a(+)-Ts HSP90α重组质粒构建成功。SDS-PAGE结果表明目的基因在大肠埃希菌 BL21/DE3中获得高效表达,经亲和层析获得了高纯度蛋白。重组蛋白可被其免疫的SD大鼠血清识别,表明其具有免疫原性;同时,重组蛋白能被猪带绦虫患者,亚洲带绦虫患者及牛带绦虫患者血清识别,表明重组蛋白具有免疫反应性。  结论:应用生物信息方法从猪带绦虫成虫 cDNA文库中筛选出了HSP90α基因,并对其所编码蛋白的结构与功能进行预测。猪带绦虫成虫热休克蛋白90α基因可在大肠埃希菌 BL21/DE3中获得具有免疫活性的高效表达。western-blotting显示重组蛋白具有免疫原性和免疫反应性。通过本研究为进一步阐明该蛋白在猪带绦虫生理代谢的作用机制奠定了基础。同时对该蛋白免疫学功能的初步研究也为今后开展带绦虫病的应用型研究提供一定线索。
其他文献
体操是当前我国高校体育教学中的重要组成部分,不仅能够改善学生的身体素质,还能提高学生的心理素质,帮助学生塑造内在气质,对高校学生的发展具有重要意义.目前,随着高校教育
目的:观察四氯化碳(CCl4)致大鼠肝纤维化发生过程中微小RNA-200家族(miR-200s)成员微小RNA-141(miR-141)在大鼠肝脏的表达变化,探讨miR-141在肝纤维化发生机制中可能的作用。  方
为了探讨从ES细胞获取HSPC进行临床HSPCT的可行性,解决由此可能产生的问题如移植物抗宿主反应(graft versus host reaction,GVHR)和细胞免疫功能缺陷等,我们分三阶段进行了如
当股票的投机价值不复存在时,还不如政府进行全盘要约收购。中国的股市是在相当不成熟的条件下创生的,当初的指导思想不过是聚敛社会上的闲散资金支持国家建设、为国有企业筹
该研究对50例华支睾吸虫病患者(实验组)和20例健康献血员(对照组),分别测定其血清中IL-2、sIL-2R、TNF-α、IL-8及肝功能的相关参数,以观察华支睾吸虫病患者血清IL-2、sIL-2R、TN
A型肉毒毒素(Botulinum toxin-A,BTX-A)是一种高分子蛋白神经毒素,它作用于外周胆碱能神经末梢,抑制乙酰胆碱的释放,其作用是暂时的且对组织无损伤.该研究拟通过动物实验观察
目的:通过检测慢性氟中毒大鼠肝细胞中线粒体形态变化,研究肝组织中线粒体融合蛋白基因1(Mfn1)和线粒体分裂蛋白基因1(Fis1)在蛋白及mRNA水平表达的改变,来探讨慢性氟中毒肝脏损伤的
十九大在京召开习近平代表第十八届中央委员会向大会作了题为《决胜全面建成小康社会夺取新时代中国特色社会主义伟大胜利》的报告[1].报告提出要广泛开展全民健身活动,加快
钩端螺旋体病是由问号钩端螺旋体引起的一种分布广泛的自然疫源性疾病,曾在全国范围内发生过数十次规模较大的流行,严重危害着人民的健康和影响农业生产.问号钩端螺旋体的致
当前,我国倡导素质教育,力求实现学生全面发展,体育是一个国家国民体质的基础,能够反映一个国家国民的生活水平和身体素质,在高校开展体育教学,不仅能锻炼学生强壮的体魄,也