论文部分内容阅读
目的：通过观察参青方对溃疡性结肠炎模型大鼠结肠黏膜MAdCAM-1表达的影响以及对结肠组织中IL-1β、TNF-α、IL-10、iNOS等指标的影响,探讨MAdCAM-1表达异常与IL-1β、TNF-α、IL-10、炎症介质NO和T淋巴细胞介导的异常免疫应答所致的结肠粘膜损伤的关系以及参青方对其调控机制。
方法:SD大鼠60只,正常组、模型Ⅰ组、模型Ⅱ组、美沙拉嗪组、参青方低剂量组、参青方高剂量组6组,每组10只。用三硝基苯磺酸诱导T细胞免疫机制溃疡性结肠炎模型。于造模后第3天,处死模型Ⅰ组大鼠,其余各组开始给药,连续给药7天后处死。记录病变结肠组织损伤情况,大体观察参青方对溃疡性结肠炎大鼠的疗效；通过组织病理学,分析溃疡性结肠炎大鼠及对其用药干预后的结肠黏膜病理变化；采用免疫组化、RT-PCR、Western-blot实验技术,从蛋白表达水平及基因转录水平定性定量分析溃疡性结肠炎大鼠及参青方对其治疗后结肠组织MAdCAM-1蛋白表达与基因转录的情况；采用ELISA技术,定量分析溃疡性结肠炎大鼠及参青方对其治疗后结肠组织中IL-1β、TNF-α、IL-10表达变化的情况；采用RT-PCR、Western-blot技术,分析溃疡性结肠炎大鼠及参青方对其治疗后结肠组织中iNOS蛋白表达与基因转录的情况。
结果：造模3d时,模型Ⅰ组大鼠结肠黏膜病理改变表现为明显的急性炎症和溃疡形成；造模10d时,模型Ⅱ组大鼠结肠黏膜表现为炎症持续状态,而中药组大鼠结肠黏膜则较模型Ⅱ组有明显改善。结肠组织中IL-1β、TNF-α、iNOS分析结果显示,模型组较正常组明显增高；IL-10分析结果显示,模型组低于正常组,上述差异均具有统计学意义(P<0.01)。经用药干预后,参高组、参低组及美沙拉嗪组与模型Ⅱ组比较,差异均具有统计学意义(P<0.01或P<0.05),且以参高组变化趋势更为明显。正常组大鼠结肠黏膜MAdCAM-1可见少量表达,模型组MAdCAM-1蛋白表达与基因转录量均高于正常组,差异具有统计学意义(P<0.01),且模型Ⅰ组较模型Ⅱ组升高趋势更为明显(P<0.01);经用药干预后,参高组、参低组及美沙拉嗪组与模型Ⅱ组比较,MAdCAM-1的表达均下调,差异具有统计学意义(P<0.01),且以参高组降低趋势更为明显。
结论：从大体形态学、组织病理学改变判断,参青方治疗溃疡性结肠炎有效。对大鼠结肠组织MAdCAM-1进行的免疫组化、RT-PCR、Western-blot检测结果判断,溃疡性结肠炎大鼠结肠黏膜MAdCAM-1的表达异常与T淋巴细胞所介导的免疫损伤密切相关。对大鼠结肠组织IL-1β、TNF-α、IL-10进行的ELISA技术检测以及对iNOS进行的RT-PCR、Western-blot检测结果判断,上述指标含量的异常变化参与介导大鼠结肠黏膜MAdCAM-1的表达上调。参青方可能是通过调节促炎-抑炎细胞因子(IL-1β、TNF-α与IL-10)与iNOS,降低MAdCAM-1在结肠粘膜的表达水平,从而抑制循环T淋巴细胞迁移至肠道粘膜炎症部位而下调炎症反应,达到缓解大鼠溃疡性结肠炎的效应。