【摘 要】
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以几丁质酶活力测定以及菌丝体生长情况作为测定指标,对培养基碳源和氮源进行了筛选,经过正交试验得出Z01菌株的最佳发酵培养基配方Z菌株对甜叶菊斑枯病的致病菌Septoria ste
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以几丁质酶活力测定以及菌丝体生长情况作为测定指标,对培养基碳源和氮源进行了筛选,经过正交试验得出Z01菌株的最佳发酵培养基配方Z<,01>菌株对甜叶菊斑枯病的致病菌Septoria steviae有很好的拮抗作用.菌株在几丁质培养基上产生较大的水解圈,发酵液经过离心、提纯后测量几丁质酶的活性以及蛋白质的含量,发现Z<,01>具有较高的酶活,几丁质酶能水解真菌细胞壁从而有效抑制其生长,在平板上抑制致病菌Septoriasteviae的效果显著.采用一步法制备感受态E.coil DH5α,PZLCm2空质粒转化E.coilDH5α,在含氯霉素的平板上检验感受态细胞,多次试验确定使质粒活性较高时氯霉素的浓度.采用化学方法提取质粒PBS,质粒经过酶切验证,得到2.8kb的片段.在最适条件下发酵Z<,01>,Z<,01>总量DNA大量提取后,DNA全酶切得到5kb~1 0kb的片段.2.8kb的载体质粒PBS与DNA片段连接,获得重组质粒PBSZYZ204,用化学方法转化感受态细菌,在含有氨苄青霉素的几丁质平板上得到产生水解圈的阳性克隆子Z<,02>.Z<,02>菌株经过测定,其酶活力为2.83,证明重组质粒转化成功,同时说明5kb~1 0kb的DNA片段包含了几丁质酶基因的有效序列.
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