【摘 要】
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为了克隆Pseudomonas pseudoalkaligenus YS1的聚羟基脂肪酸酯（Polyhydroxyalkanoates,PHAs）合成酶基因以及其相应的调节基因,构建Pseudomonas pseudoalkaligenus YS1的BAC（Bact
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为了克隆Pseudomonas pseudoalkaligenus YS1的聚羟基脂肪酸酯（Polyhydroxyalkanoates,PHAs）合成酶基因以及其相应的调节基因,构建Pseudomonas pseudoalkaligenus YS1的BAC（Bacterical Artificial Chromosome,BAC）文库.选择pBeloBAC11载体和E.coli DH10B宿主来构建假单胞菌YS1文库.由脉冲电泳得到部分酶切的大片段DNA,与经过纯化、去磷酸化后的载体DNA连接,电转化进入感受态的宿主细胞中.转化后的细胞在含有IPTG、X-gal和氯霉素的平板上培养,筛选阳性克隆子.挑取白斑菌落,平板保存.利用RAPD方法从随机引物筛选用于目的基因克隆的探针,发现有两个引物编码的氨基酸排列与10个PHAs合成酶的保守序列相同或非常相似.拟采用其扩增的特异片段为探针,或以该引物为探针.
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