【摘 要】
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化学防治在害虫防治中是一种不可或缺的手段.鉴于目前的环境问题,尤其是食物和水体中农药残留的富集,所以寻找安全、简便、有效的处理方法已迫在眉睫.现在看来,生物整治是一
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化学防治在害虫防治中是一种不可或缺的手段.鉴于目前的环境问题,尤其是食物和水体中农药残留的富集,所以寻找安全、简便、有效的处理方法已迫在眉睫.现在看来,生物整治是一种安全、有效、对环境友好的方法.昆虫之所以能在不同的条件下存活下来,是由于它们惊人的适应能力,其中即包括独特的降解农药的能力.如果我们能大量地生产这种降解酶,并以适当的方式施用于田间,那么环境中的有害化学物质的残留即也能被分解.在我们实验室中,抗性库蚊的酯酶B1(CaE B1)基因已被成功克隆,并转化大肠杆菌.为了大量表达羧酸酯酶B1,我们采用了高密度发酵的方式.实验证明在低温条件(18℃)下得到的羧酸酯酶活性较高,酶量也较多.可能是因为在低温条件下,转录和翻译的速率都较低,蛋白有足够的时间来形成正确的折叠.总之,较低的温度利于可溶性重组蛋白的形成.利用金属亲和层析的方法将重组蛋白进行了纯化.用羧酸酯酶B1对有机磷农药降解进行了研究.实验表明在4mM的二乙酰一肟(DAM)存在时,对氧磷和CaE B1的化学剂量比提高到了45:1,氧化毒死蜱和CaE B1的化学剂量比提高到了20:1.为了测定DAM对抑制酶的复活动力学,先把酶用过量的有机磷抑制,然后用高压液相色谱把被抑制的酶和过量的有机磷分离开.每小时测定一次反应体系中的酶活情况.结果表明DAM对被对氧磷抑制的酶的复活速率常数为0.92h<-1>,而DAM对被氧化毒死蜱抑制的酶的复活动力学在复活的程度和复活速率常数上都有很大的不同.被氧化毒死蜱抑制的酶只有57﹪被复活,复活速率常数是0.79hr<-1>.CaE B1和DAM的混合使用将是有机磷农药降解的一种有效方法.
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