目的:通过检测2型糖尿病(T2DM)大鼠模型肾组织及高糖刺激的足细胞中microRNA-26a(miR-26a)、瞬时受体电位阳离子通道蛋白6(TRPC6)及nephrin的表达水平,旨在探讨miR-26a与DKD足细胞损伤的关系及其可能机制。方法:1.在30只8周龄雄性SD大鼠中随机选取20只高脂高糖喂养联合小剂量链脲佐菌素腹腔注射(STZ,30 mg/kg)构建T2DM大鼠模型,余10只设为正常对照(NC)组。造模成功后留取血、尿及肾脏标本。比较两组大鼠空腹血糖(FBG)、胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)、血肌酐(Scr)、内生肌酐清除率(Ccr)、24 h尿白蛋白(UAL)及其排泄率(UAE)等生化指标;在光镜、电镜下观察肾脏病理、足细胞超微结构改变;采用免疫组织化学技术检测瞬时受体电位阳离子通道蛋白6(TRPC6)表达、RT-PCR方法检测肾脏miR-26a、nephrin及TRPC6基因表达水平。应用Western-blot测定Nephrin,TRPC6蛋白表达水平。2.将小鼠永生化足细胞(MPC5)分为三组:正常糖(NG)组;高渗对照(HM)组;高糖(HG)组,应用RT-PCR检测三组的miR-26a、TRPC6及nephrin基因的表达水平;采用Western-blot方法检测各组nephrin和TRPC6的蛋白表达水平。结果:1.与NC组相比,T2DM组大鼠KW/BW、FBG、TC、TG、Ccr、UAL、UAE均明显升高(P<0.05),T2DM组的HDL显著低于NC组(P<0.05)。两组间Scr差异无统计学意义(P>0.05);2.光镜下显示NC组肾小球结构完整、清晰,T2DM组肾小球体积增大,系膜区扩大,毛细血管腔变窄;电镜下足细胞的足突消失、融合,数目减少;3.免疫组化结果显示T2DM组TRPC6表达较NC组上调(P<0.05);4.RT-PCR结果示:与NC组对比,T2DM组TRPC6 mRNA表达增多(P<0.05),而nephrin mRNA和miR-26a表达明显减少(均P<0.05);Pearson相关性分析结果显示:miR-26a与nephrin mRNA表达呈正相关(r=0.65,P<0.05);miR-26a与TRPC6 mRNA表达呈正相关(r=-0.77,P<0.05);miR-26a与UAL表达呈负相关(r=-0.71,P<0.05);5.Western-blot结果显示,与NC组相比,T2DM组大鼠肾组织Nephrin蛋白表达明显减少(P<0.05),TRPC6蛋白表达显著增多(P<0.05);6.细胞实验结果显示与NG组相比,HG组足细胞miR-26a表达显著减少,nephrin mRNA及蛋白表达量也明显降低(P<0.05),TRPC6蛋白的表达量则显著增多(均P<0.05)。Pearson相关性分析显示miR-26a与nephrin mRNA表达正相关(r=0.82,P<0.05),miR-26a与TRPC6 mRNA表达呈负相关(r=-0.78,P<0.05)。结论:1.miR-26a在DKD肾组织及足细胞中表达降低,并与DKD足细胞损伤密切相关。2.miR-26a可能通过负向调控TRPC6参与DKD足细胞损伤。