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研究目的：通过体内外实验检测BEZ235和多西他赛联合用药对乳腺癌细胞生物学行为的影响,分析其协同抑制肿瘤的作用及机制,并探讨Mortalin蛋白在乳腺癌中的作用机制及其预后评估作用,为乳腺癌靶向治疗提供新的药物选择。材料与方法：1)体外实验：MTT及平板克隆实验检测BEZ235和多西他赛单独或联合用药对乳腺癌细胞的增殖抑制作用；细胞划痕实验,细胞迁移实验,细胞侵袭实验观察单独或联合用药对细胞迁移的影响；Hoechst33342荧光染色法,Western blot实验检测药物处理后的乳腺癌细胞凋亡的变化；Western blot实验检测BEZ235和多西他赛单独或联合用药后PI3K/Akt/mTOR信号通路和EMT标志物分子的改变。RT-PCR实验检测不同乳腺癌细胞中Mortalin蛋白的差异表达,进一步以siMortalin方法沉默Mortalin的表达后检测诱导EMT的能力,明确Mortalin蛋白与EMT的相关性。2)体内实验：首先,建立MDA-MB231乳腺癌细胞裸鼠移植瘤模型,随机分成对照组、单独用药组和联合用药组(每组5只)。连续给药4周后检测肿瘤大小,并将肿瘤组织制成病理切片,免疫组化分析E-cadherin, p-AKT, p-S6, p-4ebp1, cleaved caspase 3蛋白的表达情况；其次,应用免疫组化方法检测Mortalin蛋白在155例乳腺浸润性导管癌中的表达情况,并分析其异常表达与乳腺癌临床病理学特点之间的关系,继而分析Mortalin蛋白表达对患者生存期的影响。结果：MTT结果显示,BEZ235与多西他赛可协同抑制乳腺癌细胞株MDA-MB231和MDA-MB468的增殖；平板克隆实验显示,BEZ235与多西他赛可协同抑制乳腺癌的克隆形成能力；细胞划痕实验,细胞迁移实验,细胞侵袭实验结果表明联合用药可明显抑制乳腺癌细胞的迁移能力；Hoechst33342荧光实验表明联合用药可明显诱导乳腺癌细胞的凋亡;Western blot实验和免疫荧光实验结果显示BEZ235与多西他赛联合用药可下调PI3K/Akt/mTOR信号通路蛋白,上调PARP蛋白,下调Bcl2, Bax蛋白,促进caspase3,8,9蛋白的活化诱导凋亡的发生；此外,Western blot实验和免疫荧光实验结果也显示BEZ235与多西他赛联合用药可抑制EMT的发生,下调snail, slug, twist和vimentin蛋白的表达,上调E-cadherin蛋白的表达；RT-PCR结果显示,MDA-MB231细胞Mortalin的mRNA水平明显高与其它乳腺癌细胞系；且Western blot实验结果显示, siMortalin方法沉默Mortalin的表达后可抑制EMT的发生；BEZ235与多西他赛可协同抑制MDA-MB231细胞的裸鼠移植瘤成瘤能力,而且联合用药组肿瘤组织坏死明显增多,p-AKT, p-S6, p-4ebp1的表达明显下调且cleaved caspase3, E-cadherin的表达明显上调。免疫组织化学结果显示,Mortalin蛋白主要定位于细胞浆,且在乳腺癌中的阳性率63.9%(99/155)明显高于导管原位癌34.6%(18/52)及正常组织15.6%(7/45),差异具有显著性,并与患者的组织分级、临床分期和有无淋巴结转移密切相关；生存期分析结果表明Mortalin蛋白的异常表达与乳腺癌的生存期密切相关。此外,多因素分析结果表明,Mortalin蛋白,临床分期与HER2表达在乳腺癌中是重要的独立风险因素。结论：1)BEZ235与多西他赛联合应用可以协同抑制乳腺癌细胞的增殖；2)BEZ235与多西他赛联合应用与诱导细胞凋亡密切相关,而且可以通过EMT抑制乳腺癌细胞的迁移；3) Mortalin蛋白在乳腺癌形成EMT过程中起着重要的作用,而且在乳腺癌中异常高表达,可以作为乳腺癌不良预后的分子标志物。