甲状腺癌的发生率占全身恶性肿瘤的1%，且呈逐年增长趋势。其中未分化甲状腺癌是最有侵袭力的实体肿瘤之一，严重影响人类健康。随着分子生物学的发展以及甲状腺癌研究领域的不断深入，与甲状腺癌发生发展相关的癌基因和抑癌基因逐步被发现，其参与甲状腺癌的发生、发展及转归的关系也逐渐成为近年研究的热点。细胞泛素特异肽酶USP22是一个新的去泛素化酶，它可以从泛素结合蛋白底物剪切泛素。USP22位于人的第17号染色体的第14个外显子。在真核生物中，USP22作为hSAGA转录辅助因子复合物的酶亚单位发挥功能。有研究报道USP22可以调控细胞周期关键调控蛋白p21，USP22缺失会导致人类肿瘤细胞G1期细胞周期阻滞。Northernblot分析结果表明USP22在包括心脏、骨骼肌等多种组织里中度表达，在肺和肝脏组织里弱表达。丝裂原活化或者T、B淋巴细胞的病毒感染可以刺激USP22的表达从而促进细胞无限增殖，表明USP22基因表达的调控主要发生在转录水平。更为重要的是，USP22被认为是公认的肿瘤标志物之一，并且USP22表达的变化与肿瘤细胞转移潜能和治疗预后可能相关。然而，导致USP22激活，尤其是参与肿瘤发生发展的机制仍不清楚。既往已经有部分研究结果发现，USP22可以表达于许多肿瘤细胞核组织，且其在肿瘤中的表达通常高于正常细胞和组织，进一步研究证实，USP22与这些肿瘤的恶性生物学行为密切相关。因此，USP22是一个潜在的肿瘤促进因子；然而，USP22在甲状腺癌中的表达情况以及是否与甲状腺癌的发生有关，目前尚未见相关研究报道，本课题将对USP22在甲状腺癌中的表达情况，以及其与甲状腺癌的增殖表型和预后进行研究，进一步探讨甲状腺癌发生发展的分子机制，并为该分子为靶点开发新的甲状腺癌抑制药物和预后检测指标提供理论依据。【目的】1、研究USP22在甲状腺癌中的表达情况和USP22对甲状腺癌细胞生长的影响；2、探讨USP22促进甲状腺癌细胞生长的可能机制。【方法】1、检测USP22在甲状腺癌及癌旁组织中的表达情况。2、通过WesternBlot检测技术探讨USP22在甲状腺癌细胞系中的蛋白水平。3、构建USP22的siRNA载体并转染细胞，获得稳定转染细胞。构建USP22的正义表达载体并转染，获得稳定转染细胞。4、鉴定不同载体的转染效果。5、观察并对比转染细胞及对照细胞的生长情况。6、通过流式细胞术观察USP22表达的变化对甲状腺癌细胞周期的影响。7、通过流式细胞术和Hoechst33258染色方法探讨USP22表达的变化对甲状腺癌细胞凋亡的影响。8、利用MTT实验、软琼脂克隆形成实验等方法研究USP22表达的变化对甲状腺癌细胞体外成瘤能力的影响。9、通过裸鼠成瘤实验探讨USP22表达的变化对甲状腺癌细胞体内成瘤能力的影响。10、观察USP22表达水平的变化对于甲状腺癌细胞中细胞周期相关蛋白表达调控的作用。【结果】1、免疫组化结果发现USP22在甲状腺癌组织中的表达显著高于癌旁组织，甲状腺癌的分化程度越低、临床分期越差则USP22的表达越高。2、USP22在正常细胞系中低表达，而在甲状腺癌细胞系中则高表达。3、成功构建了USP22的siRNA载体和正义表达载体，分别转染细胞后成功建立了USP22下调及上调的稳定细胞系。4、MTT检测结果发现，下调肿瘤细胞中USP22的表达可以抑制肿瘤细胞生长，而上调正常甲状腺细胞系中USP22的表达则促进正常甲状腺细胞增殖。5、细胞周期检测显示，USP22可以促进甲状腺癌细胞周期进展。6、凋亡检测结果发现，USP22可以抑制甲状腺癌细胞的凋亡。7、体外软琼脂克隆形成实验结果表明，下调USP22的表达可以明显抑制甲状腺癌细胞的生长。8、体内实验表明，下调USP22的表达可以抑制甲状腺癌细胞的裸鼠体内成瘤能力。9、细胞周期相关分子检测结果发现，下调USP22的表达可以降低PCNA、CyclinD1和p-Rb的表达，但增加了Rb的表达；上调USP22的表达则显著增加了细胞周期相关蛋白PCNA、CyclinD1和p-Rb的表达水平，同时下调了Rb的蛋白水平。【结论】1、相对于甲状腺癌的癌旁组织，USP22在甲状腺癌组织中的表达明显升高，且USP22的表达水平与甲状腺癌的分化和分期呈正相关。2、USP22可以促进甲状腺癌细胞的增殖，抑制甲状腺癌细胞的凋亡。3、USP22可以通过促进甲状腺癌细胞的G1/S期进展而促进了甲状腺癌细胞的生长，其机制可能为USP22通过上调PCNA、CyclinD1和p-Rb的表达和下调Rb的表达来实现的。