论文部分内容阅读
桔小实蝇 Bactrocera dorsalis、菲律宾实蝇B．philippinensis、杨桃实蝇B．carambolae和木瓜实蝇B．papayae等实蝇是比较相近的近似种，曾经定义为一个桔小实蝇复合种，形态特征难以区分，特别是口岸截获的幼虫，鉴定存在一定的困难，且检疫周期长达几周。为快速准确鉴定这些近似种实蝇，根据实蝇线粒体全序列之间的序列差异建立了四种实蝇的快速鉴定方法，并分析四种实蝇线粒体序列的分子遗传规律。
根据油橄榄实蝇B．oleae(AY210702)的线粒体全序列设计了15对引物，分别对桔小实蝇SH48、菲律宾实蝇SH65、杨桃实蝇SH68和木瓜实蝇SH63等样品的DNA进行扩增、克隆、测序和分析，拼接获得了四种实蝇完整的mtDNA基因全序列，并登录GenBank，获得GenBank登录号：DQ917577(桔小实蝇SH48)；DQ917578(木瓜实蝇SH63)；DQ995281(菲律宾实蝇SH65)；EF014414(杨桃实蝇SH68)。
对这四种实蝇mtDNA全序列进行序列差异性分析，选取差异率为2.64％，长度为2.2kb的序列片段作为桔小实蝇及其近缘种系统发育关系研究和鉴定分析的目标序列，该序列片段编码mtDNA的cob基因至nadh1基因间部分序列。收集国内外四种实蝇72个样品，通过序列扩增和测序，获得72个实蝇样品的2.2 kb mtDNA序列，序列分析发现菲律宾实蝇在该序列区段内具有两个稳定的突变位点，选取其中一个位点设计特异性引物和荧光探针，建立了菲律宾实蝇实时荧光PCR检测方法。试验结果表明，设计的TaqMan-MGB探针对于检测菲律宾实蝇具有理想的灵敏度和特异性，能够有效快速的鉴别菲律宾实蝇。