洛铂对人胃癌细胞株放射敏感性影响的基础研究

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目的:观察洛铂(LBP)对人胃癌细胞株BGC823和SGC7901放射敏感性的影响,探讨可能的机制。  方法:(1)MTT法测定不同浓度LBP对人胃癌细胞株BGC823和SGC790124小时细胞增殖抑制率,计算半数抑制浓度(IC50),以20%IC50作为增敏浓度;(2)克隆形成实验测定两株细胞单纯照射组(X射线照射剂量设为:0 Gy、2 Gy、4 Gy、6 Gy、8Gy)和加药+照射组(LBP增敏浓度+0 Gy、2 Gy、4 Gy、6 Gy、8Gy)细胞存活率,绘制细胞存活曲线、计算放射增敏比(SER)和确定干预照射剂量;(3)流式细胞术(FCM)测定两株细胞空白对照组(不照射、不加药)、单纯照射组(干预剂量X射线)、加药+照射组(增敏浓度LBP+干预剂量X射线)的细胞周期及凋亡率;(4)Western Blotting测定两株细胞空白对照组、单纯照射组、加药+照射组凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax及cleaved caspase-3表达水平。  结果:(1)人胃癌细胞株BGC823和SGC7901增殖抑制率随LBP浓度升高而升高,呈量一效关系,两株细胞IC50分别为16.08ug/ml和20.66ug/ml,增敏浓度分别选用3.2ug/ml和4.0 ug/ml;(2)两株细胞单纯照射组、加药+照射组细胞存活率随X射线剂量增加而减小,取4Gy为干预照射剂量,SER分别为1.13和1.08;(3)两株细胞单纯对照组、加药+照射组细胞周期分布与空白对照组相比,加药+照射组与单纯照射组相比,G2/M期比例均升高、S期比例降低,差异有统计学意义(P<0.01)。两株细胞照射后出现G2/M期阻滞,S期分布比例减少,加入LBP,G2/M期比例进一步增加、S期比例减少。两株细胞加药+照射组、单纯照射组凋亡率均高于空白对照组,差异具有统计学意义(P<0.01),加约+照射组细胞凋亡率较单纯放射组升高(P<0.05);(4)两株细胞单纯照射组、加约+照射组的蛋白表达水平与空白对照组的相比,Bcl-2表达水平降低,Bax、cleaved caspase-3表达水平升高,差异具有统计学意义(P<0.01),加药+照射组与单纯照射组相比,Bcl-2表达水平进一步下降,Bax、cleaved caspase-3表达水平升高,具有统计学差异(P<0.05)。照射后,细胞抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平下降,促凋亡蛋白Bax表达水平升高,激活Caspase-3,其活化产物cleaved caspase-3表达水平升高,LBP增强下调Bcl-2和上调Bax的表达水平。  结论:(1)LBP可抑制人胃癌细胞株BGC823、SGC7901增殖,呈量-效关系;(2)人胃癌细胞株BGC823、SGC7901对X射线敏感,放射线通过调控细胞周期关卡及调节凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达水平,激活Caspase-3诱导细胞凋亡;(3)LBP对两株细胞有放射增敏作用,可能存在的机制是,将细胞周期阻滞于G2/M期,减少S期分布比例,下调Bcl-2和上调Bax表达水平促进X射线诱导细胞凋亡。
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