运动性疲劳对大鼠骨骼肌蛋白质组表达谱影响的研究

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目的:分析运动疲劳对大鼠大腿骨骼肌蛋白组表达谱的影响,寻找新的与运动疲劳相关的蛋白质,以期对运动疲劳的产生机制作进一步的探讨。方法:本研究采用比较蛋白质组学方法,研究运动疲劳对大鼠后肢大腿骨骼肌蛋白质组表达谱的影响。以游泳方式建立大鼠运动疲劳模型,利用动物行为学和生物化学方法对模型的可信度进行验证。建模结束后,研磨法提取蛋白质,用Lowry法测定蛋白总量,进行二维电泳分离,通过计算机图像分析,寻找差异性蛋白质,将差异性蛋白质点分别进行质谱分析,经数据库查询,初步鉴定出这些差异蛋白。研究结果:1.利用动物行为学和生物化学方法对运动模型进行观察、检测。发现大鼠神情倦怠,双眼暗淡无光,皮毛蓬乱枯槁,片状脱落,食欲下降,对外界刺激反应迟钝,逃避和探究行为减少,运动能力下降,体重减轻,第7天和第10天较对照组明显下降,存在显著性差异。大鼠血尿素含量即刻组和12小时组与对照组相比增高,存在差异。结果提示:大鼠十天递增负荷游泳运动造成的动物疲劳状态与运动员生化指标变化基本相似,说明本实验提供的动物模型是可靠的。2.经二维电泳分离,以及计算机图像分析,发现:在实验组有12个蛋白发生明显的变化(蛋白质浓度相差3倍以上),其中9个蛋白质表达下调,3个蛋白质表达上调。3.经质谱分析,数据库查询,初步鉴定出这些差异蛋白:(1)3个表达上调的蛋白质中有两个是同一个蛋白质——肌球蛋白巯解轻链,另一个是肌球蛋白轻链1,都属于肌球蛋白轻链;(2)9个表达下调的蛋白质:三磷酸甘油醛脱氢酶,β-烯醇化酶,肌酸激酶M链,ATP-AMP转化酶,肌球蛋白重链,肌动蛋白,快速骨骼肌型肌钙蛋白Ⅰ,快速骨骼肌型肌钙蛋白T,未知蛋白RIKEN cDNA 1700001F09[Mus musculus]。结论:1、十天递增负荷游泳运动所建的运动疲劳模型,动物行为学特征和生化指标与运动员在运动中出现的运动疲劳状态时的特征相吻合,说明本实验所建立的运动疲劳模型是可靠的。2、表达下调的蛋白质中,4个酶(GAPDH;M-CK;Beta enolase;ATP-AMP转化酶)与运动疲劳时骨骼肌能量代谢失衡,代谢产物堆积以及机体的调节失衡有关。4个是骨骼肌收缩蛋白(MHC;actin;fsTnl;TnTF),可能是长时间剧烈运动导致骨骼肌蛋白质降解增加。另外一个是RIKEN cDNA 1700001F09是新蛋白,目前尚未报道。表达上调的蛋白质(MLC1、DTNB),可能与运动疲劳时机体酸性代谢产物增多,MLC1、DTNB不易解离有关。3、Beta enolase,ATP-AMP转化酶与运动疲劳的关系尚未报道,深入研究其与运动疲劳的关系,对于揭示运动疲劳的产生机制,检测运动疲劳可能有重要意义。4、fsTnI,TnTF,有可能作为骨骼肌早期损伤的较为敏感的检测指标。5、RIKEN cDNA 1700001F09是新发现的蛋白,目前尚未报道,可能与运动疲劳有关,是本研究的新亮点。
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