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目的:建立RBL-2H3细胞模型致敏检测方法,结合注射用双黄连（SHLI）超高效液相色谱（UPLC）的体外指纹图谱及血清指纹图谱,分析其谱敏相关性,探讨SHLI致敏物质基础。方法:首先对RBL-2H3细胞的培养条件及最佳实验时间进行考察,以MTT法测定SHLI组及其含药血清组对RBL-2H3细胞的抑制率,计算IC50,确定SHLI组及其含药血清组对RBL-2H3细胞作用的用量,通过测定β-氨基己糖苷酶释放率建立SHLI组及其含药血清组的致敏检测方法。然后应用UPLC技术,通过对流动相、检测波长、运行时间、柱温、流速等色谱条件的考察建立SHLI体外指纹图谱的分析方法,通过精密度、稳定性、重复性的考察确定分析方法的可靠性;通过对血清处理方法的考察及精密度、稳定性、重复性的考察确定血清指纹图谱的分析方法。最后,测定SHLI各拆方组及其含药血清组作用RBL-2H3细胞的β-氨基己糖苷酶释放率和指纹图谱,采用双变量相关分析对RBL-2H3细胞数据和指纹图谱的化学数据进行谱敏学研究,得到与致敏物质基础相关性最为密切的化学成分。结果:采用1.0× 105/mL这一细胞浓度接种,接种24h后加药为适合实验条件。MTT染色法测定SHLI组及其含药血清组对RBL-2H3细胞的抑制率,计算IC50,确定对RBL-2H3细胞作用的用量:SHLI组28.3mg/L,SHLI血清组36.4mg/L;底物法检测RBL-2H3细胞的β-氨基己糖苷酶释放率,结果显示:阳性对照组0.6942±0.0328,SHLI组0.4753±0.0224,阳性对照血清组0.8374±0.0248,SHLI血清组0.5348±0.0273,与空白对照组比较,差异显著（p<0.05和p<0.01）。建立SHLI的UPLC色谱条件为:色谱柱为DIKMA UPLC Endeavorsil C18色谱柱（50mm×2.1mm,1.8μm）;流动相为A-乙腈,B-0.1%甲酸水溶液;流速为0.3mL/min;检测波长为243nm;柱温为30℃;进样量为2μL;洗脱梯度程序为0-1min,5%A;1-3.5min,5%A-13%A;3.5-7.5min,13%A-23%A;7.5-9min,23%A-29%A;9-14min,29%A-50%A。体外指纹图谱的精密度、稳定性、重复性考察结果显示各色谱峰的保留时间和峰面积RSD均在3%以内,相似度均在0.9以上,标定了 1 7个共有峰,将各峰与对照品进行比对,指认了 SHLI的第5、6、1 1、1 5、1 6、1 7号峰分别为绿原酸、紫丁香苷、连翘酯苷A、黄芩苷、连翘苷、木犀草素。血清的处理方法为甲醇-乙腈沉淀法,色谱条件同体外一致,血清指纹图谱精密度、稳定性、重复性考察结果显示各色谱峰的相对保留时间和相对峰面积RSD均在3%以内,相似度均在0.9以上,共得到22个共有峰,经与对照品的对比,鉴定第5、6、14、19、20、21号峰分别为绿原酸、紫丁香苷、连翘酯苷A、黄芩苷、连翘苷、木犀草素。MTT法确定SHLI各拆方组及其含药血清组对RBL-2H3细胞作用的用量:双花组1.87 mg/L,连翘组0.96 mg/L,黄芩组4.02mg/L,双花连翘组0.19mg/L,双花黄芩组7.93 mg/L,连翘黄芩组0.91 mg/L,双花血清组2.32 mg/L,连翘血清组1.47 mg/L,黄芩血清组6.89mg/L,双花连翘血清组0.67mg/L,双花黄芩血清组11.75 mg/L,连翘黄芩血清组2.08 mg/L。底物法检测RBL-2H3细胞的β-氨基己糖苷酶释放率:双花组0.5036±0.0238,连翘组0.1621±0.0113,黄芩组0.2235±0.0097,双花连翘组0.5476±0.0364,双花黄芩组0.2865±0.0373,连翘黄芩组0.1537±0.0241,双花血清组0.5291±0.0116,连翘血清组0.1894±0.0425,黄芩血清组0.2488±0.0223,双花连翘血清组0.5845±0.0153,双花黄芩血清组0.3092±0.0442,连翘黄芩血清组0.1865±0.0691,与空白对照组比较,差异显著（p<0.05和p<0.01）。SHLI各拆方组及其含药血清组指纹图谱的相似度均在0.9以上,相似度良好。谱敏相关性分析结果表明,体外指纹图谱中的5、6、7、8、13、14号峰与致敏关系密切（p<0.05）,双变量相关分析所得Pearson相关系数分别为0.872、0.888、0.880、0.894、0.925、0.683,经过比对,这些峰主要来自于双花,也有部分与连翘有关;血清指纹图谱中的5、6、7、8、17、18号峰与致敏关系密切（p<0.05）,双变量相关分析所得Pearson相关系数分别为0.673、0.653、0.781、0.724、0.735、0.652,经过比对推测这些峰主要来源于双花代谢产生,部分可能由连翘代谢。结论:本文建立的RBL-2H3细胞模型致敏检测方法和SHLI的UPLC分析方法简单准确、重现性可靠,致敏效应与指纹图谱有很好的相关性,为进一步确定SHLI中的致敏物质奠定基础,并向中药注射剂（TCMI）致敏性检测实验提供新的方法和思路。