【摘 要】
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杜仲是我国独有的经济树种,其重要产物为杜仲胶,杜仲胶是一种反式聚异戊二烯,其合成途径研究较少,特别对橡胶颗粒的生物发生和稳定性至关重要的小橡胶颗粒蛋白(SRPP)家族蛋白的研究更是鲜有报道。因此本研究通过克隆SRPP基因启动子,分析SRPP基因启动子顺式作用元件,进一步分析SRPP基因的表达模式;通过筛选与SRPP基因启动子区域互作的转录因子,使用生物信息学方式分析转录因子的功能,揭示转录因子调控
【基金项目】
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项目区化肥减施增效技术效果定点监测2016YFD0201306-05;
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杜仲是我国独有的经济树种,其重要产物为杜仲胶,杜仲胶是一种反式聚异戊二烯,其合成途径研究较少,特别对橡胶颗粒的生物发生和稳定性至关重要的小橡胶颗粒蛋白(SRPP)家族蛋白的研究更是鲜有报道。因此本研究通过克隆SRPP基因启动子,分析SRPP基因启动子顺式作用元件,进一步分析SRPP基因的表达模式;通过筛选与SRPP基因启动子区域互作的转录因子,使用生物信息学方式分析转录因子的功能,揭示转录因子调控SRPP基因的表达模式。1.SRPP基因启动子序列克隆及分析通过PCR扩增实验克隆SRPP6基因1994bp的启动子序列和SRPP7基因2011bp的启动子序列,两者与基因组序列比对率均为99.45%;通过基因步移实验获得SRPP1基因5’方向1895bp的启动子序列。SRPP1、SRPP6和SRPP7基因的启动子上存在大量植物激素调控、环境胁迫、光调控以及生长调控相关的顺式作用元件,SRPP6基因启动子还存在大量光调控顺式作用元件。2.SRPP基因表达模式分析同一基因在不同部位的表达模式结果显示,SRPP1、SRPP2、SRPP3和SRPP5基因表达模式相似,表达量在树皮,叶片,果皮,根中依次减少;SRPP6和SRPP7基因表达模式相似,在果皮中表达量最高,树皮和叶片次之,在根中最低;而SRPP4总体表达量都比较低,根与其他部位表达量差距最小。同一部位不同SRPP基因的表达量模式显示,在叶片中SRPP1,7基因表达量较高,在果实中SRPP1、SRPP6和SRPP7基因表达较高,在树皮中SRPP1,2,5,7基因表达量较高。外施植物激素实验结果显示,喷施ABA,GA3和茉莉酸甲酯后,SRPP1、SRPP6和SRPP7基因的表达量都呈现下降的趋势;喷施乙烯利后,SRPP1、SRPP6和SRPP7基因呈现一个先上升后下降的趋势,表明外施乙烯可能有助于杜仲胶的合成。SRPP1、SRPP6和SRPP7基因启动子活性在转基因烟草的根,茎,叶中依次减弱,这与SRPP1、SRPP6和SRPP7在杜仲中茎,叶,根的表达量趋势并不完全一致,在茎和叶片中的趋势是相同的,主要差异是在根中。3.SRPP基因互作转录因子的筛选和分析本研究成功构建pHIS2-SRPP1,pHIS2-SRPP6,pHIS2-SRPP7诱饵表达载体,SRPP1酵母单杂交获得14个通过了His报告基因检测的阳性克隆,SRPP6酵母单杂交获得16个通过了His报告基因检测的阳性克隆,SRPP7酵母单杂交获得10个通过了His报告基因检测的阳性克隆,通过测序及生物信息学分析发现这些阳性克隆中可能并未存在转录因子。
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